NIH/3T3细胞是从小鼠NIH/Swiss胚胎中分离的成纤维细胞系，对肉瘤病毒和白血病病毒敏感，特别适用于DNA转染研究。

NIH/3T3细胞的典型应用模型

病毒感染模型：

• 肉瘤病毒感染模型：NIH/3T3细胞可用于建立肉瘤病毒感染模型，研究肉瘤病毒的感染机制、病毒复制周期以及肿瘤形成机制等。

• 白血病病毒感染模型：利用NIH/3T3细胞可以构建白血病病毒感染模型，探究白血病病毒与宿主细胞的相互作用、病毒复制与传播等相关机制。

DNA转染研究模型：

• 基因转染模型：NIH/3T3细胞可作为基因转染研究的模型细胞，用于向细胞内导入外源性DNA，探究基因的功能和调控机制，以及基因在细胞内的表达和影响。

• 转化实验模型：NIH/3T3细胞系常被用于进行转化实验，研究肿瘤相关基因的功能、致癌机制以及肿瘤细胞的增殖和转移等过程，有助于揭示肿瘤发生发展的分子机制。

复苏NIH/3T3细胞

• 在37℃水浴中快速摇晃解冻含有1mL NIH/3T3细胞悬液的冻存管。

• 将解冻的NIH/3T3细胞悬液加入8-10mL培养基中，并混合均匀。

• 在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。

• 将所有NIH/3T3细胞悬液加入培养瓶中，进行过夜培养。

NIH/3T3细胞传代

• 当NIH/3T3细胞密度达到80%-90%时，即可进行传代培养。

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗NIH/3T3细胞1-2次。

• 加入1mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，37℃培养箱中消化1-2分钟。

• 在显微镜下观察NIH/3T3细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，则迅速终止消化并补加培养基。

• 补加培养基后，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加培养液后吹匀。

• 将NIH/3T3细胞悬液按1：2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中。

NIH/3T3细胞冻存

• 当NIH/3T3细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

• 弃去培养基后，用PBS清洗NIH/3T3细胞一遍后加入1mL胰酶。

• NIH/3T3细胞变圆脱落后，加入4mL含血清的培养基终止消化。

• 使用血球计数板计数后，进行离心去除上清液。

• 加入血清重悬NIH/3T3细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，DMSO终浓度为5%，每支冻存管冻存1mL细胞悬液。

• 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱4个小时以上转入液氮灌储存。