MC3T3-E1 Subclone 14小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14是从小鼠新生儿分离的前成骨细胞系分离一系列克隆中的一个，属于一系列克隆中的代表性亚克隆。MC3T3-E1细胞系特别适用于体外研究成骨细胞分化以及细胞外基质（ECM）信号传导的机制，其行为类似于原始颅骨成骨细胞。

MC3T3-E1细胞具有一定的致瘤性，能够在免疫缺陷小鼠体内形成骨样小骨。

基因表达：MC3T3-E1细胞表达胶原蛋白。

MC3T3-E1 Subclone 14在抗坏血酸和3-4 mM无机磷酸盐的培养条件下生长，表现出高水平的成骨细胞分化能力。经过10天的培养，形成了高度矿化的细胞外基质（ECM），这是骨组织形成的重要步骤之一。

相比之下，其他亚克隆，比如MC3T3亚克隆24和MC3T3子克隆30，在相同的培养条件下表现出较低的成骨细胞分化能力，不能形成矿化的ECM。因此，它们可用作亚克隆4细胞和14细胞的阴性对照。矿化亚克隆选择性表达成骨细胞标志物、骨唾液蛋白（BSP）、骨钙素（OCN）和甲状旁腺激素（PTH）/甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrP）受体的mRNA。

在培养条件下，高度分化的MC3T3-E1 Subclone 14细胞和分化程度较低的细胞产生了类似量的胶原，并表达了相对基础水平的成骨细胞相关转录因子Osf2/Cbfa1的mRNA。这表明即使细胞分化程度不同，它们对于胶原的合成以及关键转录因子的表达都具有一定的稳定性。

植入免疫缺陷小鼠后，高分化的亚克隆形成类似编织骨的骨样小骨，而分化差的细胞只产生纤维组织。

MC3T3-E1细胞产品参数表

细胞名称	MC3T3-E1 Subclone 14（小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14）
细胞别称	MC3T3-E1; Mc3T3-E1; MC3T3E1; MC-3T3-E1; MC 3T3-E1; mc3t3e1
来源	胚胎/新生鼠；颅骨；C57BL/6；小于1日龄
种属	小鼠
组织来源	取样部位为骨，具体为颅骨
疾病	小鼠胚胎成骨
细胞形态	成纤维细胞样
细胞类型	正常细胞
生长特性	贴壁生长
分化能力	高水平的成骨细胞分化能力，形成高度矿化的ECM
分化程度较低对照	MC3T3亚克隆24和MC3T3子克隆30
胶原产量	类似量的胶原产生
转录因子表达水平	表达相对基础水平的Osf2/Cbfa1的mRNA
生长特征	成纤维细胞样，贴壁生长
规格	T25瓶或者1mL冻存管包装
传代比例/细胞消化	1:2传代,消化3-4分钟
完全培养基配置	使用MEMα培养基，配制含有10%胎牛血清和1%双抗的培养基
培养环境	空气，95%；二氧化碳 (CO2)，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
冻存条件	冻存液：90%FBS，DMSO 10%
应用	体外研究成骨细胞分化和ECM信号传导的模型系统
生物安全等级	1
收录	CCTCC
分化调节	MC3T3-E1细胞的碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）mRNA和蛋白的表达可以通过TGF-β和bFGF的处理来调节
生长因子作用	前列腺素F2a可以通过上调MC3T3-E1细胞胰岛素样生长因子I受体来刺激DNA合成和增殖
分泌物和表达物	MC3T3-E1细胞分泌胶原并在RNA中表达小鼠白血病抑制因子（mLIF）

准备材料：

• α-MEM培养基

• 胎牛血清（FBS）

• 青霉素/链霉素（P/S）

• 0.25%胰酶-EDTA

• 培养皿、吸头、移液管等实验器材

• CO2培养箱

• 显微镜

MC3T3-E1细胞培养步骤：

培养基配制：

• 将α-MEM培养基加热至37摄氏度，加入10% FBS和1% P/S。

细胞传代：

• 当细胞密度达到80-90%时，使用0.25%胰酶-EDTA进行细胞消化。

• 将消化后的细胞分配到新的培养皿中，按照1:2至1:4的比例进行传代。

培养条件：

• 将细胞培养在37摄氏度、5% CO2的培养箱中。

• 每周更换新鲜培养基2-3次，保持细胞的健康状态。

细胞观察：

• 定期观察mc3t3-e1细胞形态和生长状态，确保细胞呈现成纤维细胞样形态并贴壁生长。

诱导分化：

• 如果需要，可添加特定的生长因子或药物，如β-甘油磷酸钠和维生素C，来诱导MC3T3-E1细胞分化为特定类型的细胞。

细胞质量控制：

• 定期检查mc3t3-e1细胞是否受到支原体等微生物污染，确保细胞系的纯度和健康。

MC3T3-E1细胞培养注意事项：

• 操作过程中保持实验环境的清洁和无菌。

• 严格控制培养条件，确保mc3t3-e1细胞的稳定生长和分化状态。