A-427细胞系由Giard D.J. 建立，源自一位52岁白人男性肺癌患者的肿瘤组织。A427细胞系表现出上皮细胞样形态和贴壁生长特性，广泛用于肺癌尤其是肺腺癌的研究。

A427细胞参数表

细胞名称	A427细胞（人肺癌细胞）
细胞别称	A-427; A427；人肺腺癌细胞系
来源	52岁肺癌男性白人患者；
细胞特性	上皮细胞样，多角形；贴壁生长
培养基	MEM + 10% FBS + 1% 青霉素/链霉素
培养环境	37°C；95% 空气 + 5% CO2；湿度70%-80%
传代/换液	比例1:2-1:4；每周2-3次换液
倍增时间	约40-70小时或48-72小时
生物安全等级	1级
致瘤性	在裸鼠中可形成未分化的腺癌样肿瘤
冻存条件	90%血清+10%DMSO；液氮保存

A427人肺癌细胞培养教程

细胞复苏

• 将A-427细胞冻存管从液氮中取出，迅速放入37°C水浴中快速解冻。

• 将解冻的A-427细胞悬液转移到含4 mL预热培养基的15 mL离心管中。

• 以1000 RPM离心4分钟，弃去上清。

• 用1 mL新鲜培养基重悬A-427细胞。

• 将A-427细胞悬液转移到含5 mL培养基的培养瓶中。

• 次日换液并检查A-427细胞密度。

细胞传代

• 当A-427细胞密度达80%-90%时进行传代。

• 弃去旧培养基，用PBS清洗A-427细胞1-2次。

• 加入适量胰酶，待A-427细胞变圆脱落。

• 加入2倍体积培养基终止消化。

• 以1000 RPM离心5分钟，弃去上清。

• 用新鲜培养基重悬A-427细胞。

• 按1:2到1:5的比例将A-427细胞分配到新的培养瓶中。

• 添加新鲜培养基至适当体积。

换液频率

• 每2-3天换液一次。

细胞冻存

• 收集处于良好生长状态的A-427细胞。

• 按上述步骤消化、离心A-427细胞。

• 用90%血清 + 10% DMSO的冻存液重悬A-427细胞。

• 将A-427细胞悬液分装到冻存管中，每管细胞数大于1×10^6个。

• 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80°C冰箱至少2小时。

• 转移到液氮中长期保存。

注意事项

• 保持操作过程中的无菌环境。

• 定期检查A-427细胞形态和生长状况。

• 避免A-427细胞过度生长或密度过高。

• 定期进行支原体检测，确保A-427细胞未被污染。

传代比例对实验结果的影响

细胞密度和生长速度：

• 高传代比例（1:4）：A-427细胞密度较低，竞争减少，生长速度较快，但达到实验所需密度可能需要更长时间。

• 低传代比例（1:2）：A-427细胞密度较高，竞争增加，生长速度较慢，但更快达到实验所需密度。

细胞状态和活力：

• 高传代比例：低密度下生长，A-427细胞健康度和活力更高，但过于频繁的传代可能导致应激。

• 低传代比例：高密度下生长，可能导致营养竞争和废物积累，A-427细胞状态不佳，活力下降。

实验一致性：

• 一致的传代比例对于实验结果的可重复性至关重要。不同的传代比例可能导致A-427细胞生理状态变化，影响实验结果的一致性和可重复性。

温度条件对A-427细胞生长的影响

37°C（标准条件）：

• A-427细胞生长最佳，增殖速度快，细胞形态正常，实验结果可靠。

低于37°C：

• 35°C：A-427细胞生长减慢，代谢活动下降，细胞可能进入休眠状态，长期培养可能导致状态不佳。

• 32°C：生长显著减慢，A-427细胞周期停滞，活力下降。

高于37°C：

• 39°C：A-427细胞生长速度加快，但可能导致应激和蛋白质折叠错误，长期培养可能导致细胞死亡。

• 41°C：A-427细胞生长受到严重抑制，细胞可能发生凋亡或坏死。