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产品名称:WI-38细胞系(人胚肺细胞)
产品详细说明
来源:正常肺
细胞特征:贴壁细胞 , 成纤维细胞样
培养基:MEM+10% FBS+1% P/S

其他:wi-38细胞是首个用于人类疫苗制备的人类二倍体细胞系、可用于灭活病毒检测

WI-38人胚肺细胞系是第一个用于人类疫苗制备的人类二倍体细胞系,由美国生物学家Leonard Hayflick于1960年建立。WI-38细胞是从一个人工流产的14周雌性胎儿的肺组织中分离。

WI-38细胞是体外培养的人胚肺成纤维细胞,属于有限细胞系,与通常为非整倍体的永生化细胞系不同,WI-38细胞在体外培养时能够维持二倍体状态,各方面特性与正常细胞相似。

WI-38细胞系在冷冻过程中曾发现第8通道安瓿含有微球菌污染,但通过在抗生素存在下的多次传代处理后得到清除。

为了增强细胞的生长,可以在培养基中添加肿瘤坏死因子α(TNF-α)。由于其稳定的二倍体特性和对病毒的敏感性,WI-38细胞是研究病毒感染机制和开发疫苗的理想模型。

WI-38细胞系特征特性

  • wi-38细胞是有限细胞系,寿命约为50±10代、可通过添加TNF-α促进生长

  • wi-38细胞表达G6PD B型同工酶

  • 分子特征:逆转录酶表达阴性

  • 病毒敏感性:易感水疱性口炎病毒、单纯疱疹病毒、伪狂犬病病毒、脊髓灰质炎病毒1型等

  • wi-38细胞是首个用于人类疫苗制备的人类二倍体细胞系、可用于灭活病毒检测、适合作为转染宿主

  • wi-38细胞与正常体细胞性状相近、为终末分化细胞,不具分化潜能

WI-38细胞系参数表

细胞名称 WI-38细胞系(人胚肺细胞)
细胞别称 Wi-38; WI 38; WI38; Wistar Institute-38; AG06814-J; AG06814-M; AG06814-N
细胞类型 人胚肺成纤维细胞
来源 3个月大的女性胎儿肺组织
建立信息 1960年,雷纳德·海弗里克(Leonard Hayflick)
形态特征 梭形,贴壁生长,界限模糊;核大呈圆形,可含多个核仁
染色体/分化 正常二倍体;终末分化,无分化潜能
生长特性 细胞寿命约50±10代;倍增时间24小时
培养基 MEM培养基;15%胎牛血清,1%双抗
培养条件 37°C,5% CO2,70-80%湿度;
生长促进因子 TNF-α可促进生长
传代比例 首次传代建议1:2(T25培养瓶)
冻存复苏 冻存液:90%血清,10% DMSO;37°C水浴快速解冻
酶活性/同工酶 逆转录酶阴性;G6PD,B型;端粒酶活性随传代降低
病毒敏感性 水疱性口炎、单纯疱疹、伪狂犬病、脊髓灰质炎1型病毒
主要应用 疫苗制备、病毒检测、转染宿主、肿瘤机理研究
疫苗生产 风疹、狂犬病、腺病毒、小儿麻痹、麻疹、水痘、带状疱疹
永生化处理 可通过射线照射、病毒转化等手段实现
细胞衰老机制 与端粒缩短有关
保存时间 理论上从1976年起可使用66年

培养教程

WI-38人胚肺细胞系培养教程

WI-38细胞复苏

  • 从液氮中取出冻存的WI-38细胞管,迅速放入37°C水浴中解冻。

  • 解冻后立即用70%酒精消毒WI-38细胞管外表面。

  • 将WI-38细胞悬液转移到含有10ml预热培养基的离心管中,1000rpm离心5分钟。

  • 弃去上清,加入新鲜培养基重悬WI-38细胞,转移到T25培养瓶中。

WI-38细胞培养

  • 将WI-38细胞培养瓶放入37°C、5% CO2的培养箱中。

  • 每隔2-3天更换WI-38细胞培养基,观察细胞生长情况。

WI-38细胞传代

  • 当WI-38细胞达到80-90%汇合时,进行传代。

  • 去除旧培养基,用PBS洗涤WI-38细胞。

  • 加入0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液,37°C孵育3-5分钟,观察WI-38细胞脱落。

  • 加入新鲜培养基中和胰蛋白酶,轻轻吹打瓶壁,形成WI-38细胞悬液。

  • 1000rpm离心5分钟,弃去上清,重悬WI-38细胞。

  • 按1:2比例将WI-38细胞接种到新的培养瓶中,加入适量新鲜培养基。

WI-38细胞计数

  • 使用血细胞计数板进行WI-38细胞计数。

  • 将WI-38细胞悬液吸出少许,滴加在计数板上,静置3分钟后镜下观察。

  • 计算4大格WI-38细胞总数,按公式计算WI-38细胞浓度。

WI-38细胞冻存

  • 当WI-38细胞状态良好时,可进行冻存。

  • 收集WI-38细胞悬液,离心后重悬于冻存液(90%血清,10% DMSO)。

  • 分装到冻存管中,逐步降温至-80°C,随后转移到液氮中长期保存。

注意事项

  • 培养WI-38细胞过程中保持无菌操作,避免污染。

  • WI-38细胞传代时避免过度消化,影响细胞活性。

  • 定期观察WI-38细胞形态和生长状态,及时调整培养条件。

常见污染问题及预防措施

  • 细菌污染:严格无菌操作,定期消毒WI-38细胞培养室和器具。

  • 真菌污染:保持WI-38细胞培养环境清洁,定期检查和清理培养箱。

  • 支原体污染:定期检测和使用无污染的试剂和培养基。

  • 病毒污染:使用无污染的WI-38细胞系和试剂,操作时注意个人防护。

  • 交叉污染:严格分隔操作不同WI-38细胞系,避免器具混用和操作不规范。

STR鉴定及相关

Amelogenin X
CSF1PO 10,12
D1S1656 11,18.3
D2S441 11
D2S1338 19,25
D3S1358 16,17
D5S818 10
D7S820 9,11
D8S1179 14
D10S1248 13,15
D12S391 21,23
D13S317 11
D16S539 11,12
D18S51 16,18
D19S433 13,16.2
D21S11 30,30.2
D22S1045 11,17
FGA 22,24
Penta D 13
Penta E 13,14
TH01 8,9.3
TPOX 8
vWA 19,20


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