A9细胞是一种源自小鼠脂肪组织的成纤维细胞样细胞系，起源于1940年建立的L929细胞株。L929细胞株最初来自于雄性C3H/An小鼠的正常皮下乳晕和脂肪组织。（A9细胞是从野生型细胞株L中分离得到的小鼠皮下结缔组织细胞的衍生系。）

A9细胞对HAT选择培养基敏感，同时缺失了腺苷转磷酸核糖基酶与次黄嘌呤转磷酸核糖基酶。此外，A9细胞对8-氮鸟嘌呤(0.003mg/ml)和6-硫代鸟嘌呤(0.1mM)具有抗性。

A9细胞株的一个显著特征是它们表达腺苷磷酸核糖基转移酶（APRT）和次黄嘌呤磷酸核糖基转换酶（HPRT），分别表示为APRT+和HPRT+。A9细胞属于杂交瘤细胞类型，是通过将来自小鼠（Mus musculus）的B淋巴细胞与同一物种的骨髓瘤细胞融合而形成的。这种独特的组合使得A9细胞同时表现出B淋巴细胞和骨髓瘤细胞的特性。

由于A9细胞对伪狂犬病病毒（PRV）、印第安纳毒株的水泡性口炎病毒（VSV）和单纯疱疹病毒（HSV）等病毒的敏感性和反应，使其在病毒研究中具有重要价值。这种敏感性使得A9细胞成为研究病毒复制、发病机制以及潜在的抗病毒治疗的理想模型。在免疫学研究中，A9细胞也是一个有价值的模型，用于探究免疫反应、抗体产生、单克隆抗体产生以及杂交瘤技术等方面。此外，A9细胞的快速增殖速度（大约24小时的倍增时间）为实验和下游应用提供了充足的细胞供应。

A9细胞参数表

细胞名称	A9细胞（小鼠皮下结缔组织细胞）
别称	A9; A9 (Hamprecht); A9(Hamprecht); AG 9; GM00346; GM-346; GM346
来源	皮下结缔组织，自发永生，雄性，C3H/An，100日龄
细胞形态	成纤维细胞样
细胞类型	正常细胞
生长特性	贴壁细胞
培养条件	DMEM + 10% FBS + 1% P/S
	气相：空气，95%；二氧化碳 (CO2)，5%
	温度：37°C
冻存条件	基础培养基 + 5% DMSO + 20% FBS
	冻存液：55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO
	温度：液氮
传代方法	1:3传代，2-3天传一代
	推荐传代比例：1:3-1:4
	推荐换液频率：2-3次/周
细胞特性	对HAT选择培养基敏感，缺失腺苷转磷酸核糖基酶（APRT）和次黄嘌呤转磷酸核糖基酶（HPRT）
	对8-氮鸟嘌呤(0.003mg/ml)和6-硫代鸟嘌呤(0.1mM)有抗性
生物安全等级	BSL-1
致瘤性	Yes, in nude mice.
细胞污染	HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性
背景描述	A9细胞是从野生型细胞株L中分离得到的衍生系，具有对HAT选择培养基的敏感性，缺失了腺苷转磷酸核糖基酶与次黄嘌呤转磷酸核糖基酶，同时对特定药物具有抗性。

1. 细胞接收及检查：

• 收到A9细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若有破损、液溢出或细胞污染，请及时联系我们并拍照记录。

• 使用低倍镜（4或5X物镜）下确认A9细胞的生长状态，并在10X和20X物镜下观察细胞形态，同时拍摄细胞状态照片和培养瓶外观照片，作为细胞状态的依据。

2. 细胞处理：

复苏A9细胞：

• 将含有1mL A9细胞悬液的冻存管在37°C水浴中快速解冻。

• 加入4mL培养基，混合均匀后离心，弃去上清液，补充1-2mL培养基后吹匀。

• 将所有A9细胞悬液加入培养瓶中培养过夜。

A9细胞传代：

• 若A9细胞密度达到80%-90%，可进行传代培养。

• 对于贴壁A9细胞，推荐传代比例为1:2。

A9细胞冻存：

• 待A9细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

• 使用冻存液（50% basal medium+40% FBS+10% DMSO）进行冻存。

3. 培养操作：

• 将A9细胞培养瓶置于37°C培养箱中放置约2-3小时，使细胞适应培养条件。

4. 贴壁A9细胞传代：

• 弃去培养上清，用PBS润洗A9细胞1-2次。

• 加入0.25% Trypsin-EDTA溶液消化1-2分钟，观察A9细胞消化情况。

• 加入培养基终止消化，按1：2到1：5的比例分配到新的培养瓶中。

5. 冻存处理：

• 弃去培养基，用PBS清洗瓶底，加入胰酶消化A9细胞。

• 离心后加入DMSO至最终浓度为10%，分配到冻存管中进行冻存。

注意事项：

• 培养操作需在无菌条件下进行，避免细菌和真菌的污染。

• 定期观察A9细胞形态和生长情况，及时进行传代和处理。

• 冻存液需按规定比例配制，记录A9细胞冻存位置以便下次使用。

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