RLE-6TN细胞系源自56日龄雄性FISCHER 344 (F344) 大鼠的肺泡Ⅱ型细胞，通过链霉蛋白酶溶液对气道进行灌注，从肺中成功分离。RLE-6TN细胞系在传代至第5代时，以脂质体介导的转染方法将SV40 (pRSV-T DNA) 导入细胞中。尽管引入了SV40，但核免疫染色和PCR检测显示，细胞中并未检测到SV40-T抗原，表明细胞实现了自发的永生化，而非依赖外源性SV40基因的长期表达。永生法: SV40大T抗原转化

RLE-6TN细胞特性特征

• 核型稳定性：从第19代到第70代，RLE-6TN细胞保持接近二倍体，50%或更多的细胞含有42条染色体，并在第37代时观察到1号染色体和15号染色体之间的易位。

• 细胞角蛋白：表达细胞角蛋白8和19，这些是肺泡Ⅱ型细胞的标志性蛋白。

• 脂质包涵体：RLE-6TN细胞含有脂质包涵体，可以通过磷化氢3R染色和电子显微镜进行确认。

• 碱性磷酸酶：RLE-6TN细胞不表达碱性磷酸酶活性，这一特征有助于区分其与其他类型的肺泡细胞。

• RLE-6TN细胞对几种趋化因子的表达与原代培养的肺泡Ⅱ型细胞相似，这表明其在功能上可能保留了原代细胞的一些特征。

• 致瘤性：RLE-6TN细胞在裸鼠中注射后不会致瘤，显示出其安全性和应用潜力。

• 尽管RLE-6TN细胞不表达SV40-T抗原，仍需将其视为潜在的生物危害材料进行严格管理。

RLE-6TN细胞参数表

RLE-6TN大鼠肺泡Ⅱ型细胞培养教程

冻存的RLE6TN细胞复苏步骤

• 从液氮罐中取出RLE6TN细胞冻存管，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动，在30-60秒内使RLE6TN细胞完全融化。

• 使用70%酒精擦拭冻存管的外部，确保无菌操作。

• 打开冻存管，将RLE6TN细胞悬液转移至离心管中，缓慢加入4-6 mL完全培养基，以减少渗透压对RLE6TN细胞的影响。

• 以1000 RPM离心3-5分钟，去除上清液以去除冷冻保护剂。

• 使用新鲜的完全培养基重悬RLE6TN细胞，并将其移入培养瓶中，加入6-8 mL培养基。

• 将培养瓶放入37℃培养箱中过夜，使RLE6TN细胞逐渐恢复贴壁生长。

观察RLE6TN细胞的生长状态

• 第二天，显微镜下观察RLE6TN细胞的生长密度和贴壁情况。确保RLE6TN细胞形态正常，表面光滑，无细胞碎片或变形。若观察到细胞活跃，说明复苏操作成功。

RLE6TN细胞的传代步骤

• 当RLE6TN细胞密度达到70%-80%时，可进行传代。常规比例为1:2或1:3。

• 按以下步骤进行RLE6TN细胞传代：

• 洗涤：用PBS轻柔清洗RLE6TN细胞培养瓶，以去除残留培养基。

• 消化：加入0.25%胰酶，置于37℃消化2-5分钟，待RLE6TN细胞呈圆形脱离培养瓶表面。

• 终止消化：加入完全培养基中和胰酶，以防止过度消化。

• 离心与重悬：转移RLE6TN细胞悬液至离心管，1000 RPM离心3-5分钟，去除上清。

• 接种：用新鲜培养基重悬RLE6TN细胞，并按照适宜比例接种至新的培养瓶中。

• 培养基更换频率：每周2-3次，以维持RLE6TN细胞的营养和生长条件。

注意事项

• 无菌操作：确保所有操作步骤在无菌条件下进行，以防止RLE6TN细胞的污染。

• 细胞状态检查：使用显微镜定期检查RLE6TN细胞的形态和生长状态，确保无细胞碎片和变形。

• 细胞运输管理：在细胞运输过程中，注意RLE6TN细胞的温度控制，以避免温度变化对其活性的影响。