DI TNC1细胞系源自1日龄大鼠的脑间质组织，是通过1型星形胶质细胞的原代培养建立的。在初始培养3天后，使用含SV40早期致癌区的DNA构建体对细胞进行转染，该构建体在GFAP启动子（pGFA-SV-Tt）的控制下表达，从而赋予细胞永生化特性。具体过程包括脂质体介导的转染，将SV40大T抗原基因（SV40LT）导入细胞，随后通过G418抗生素筛选阳性克隆，确保仅成功整合该基因的细胞存活。

DI TNC1细胞展现了与1型星形胶质细胞表型一致的特征，如对胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的免疫反应性，以及对γ-氨基丁酸（GABA）的高亲和力摄取能力（可被β-丙氨酸抑制）。DI TNC1细胞表达水平上与原代星形胶质细胞类似，产生活性α2巨球蛋白，但转铁蛋白的表达量较低。DI TNC1细胞在神经发育、损伤修复以及脑部疾病模型研究中具有重要的应用价值。

DI TNC1细胞特性特征

• DI TNC1细胞表现出GFAP的免疫反应性，这是一种标志性蛋白，表明其为星形胶质细胞。

• γ-氨基丁酸（GABA）摄取机制：DI TNC1细胞具有高亲和力的GABA摄取机制，可被β-丙氨酸抑制的γ-氨基丁酸（GABA）的高亲和力摄取机制。

• DI TNC1细胞产生的α2巨球蛋白量与原代星形胶质细胞相似，但转铁蛋白的产生量较少。

• DI TNC1细胞不产生前脑啡肽A，也不表达2型星形胶质细胞特有的O4或A2B5表位，也不表达半乳糖苷。

• 致瘤性测试：在免疫抑制的小鼠中未显示致瘤性，但在半固体培养基中能够形成集落。

• SV40T抗原：通过免疫染色，超过95%的DI TNC1细胞核中检测到SV40T抗原，表明其成功转染SV40早期致癌区DNA构建体

DI TNC1细胞参数表

DI TNC1大鼠脑间质细胞培养教程

DI TNC1细胞的复苏

• 将冻存的DI TNC1细胞迅速置于37°C水浴中解冻，轻轻摇晃冻存管，使细胞悬液均匀。

• 将解冻后的DI TNC1细胞加入到4-6 mL完全培养基中，轻轻混合均匀。

• 以1000 RPM的速度离心3-5分钟，弃去上清液。

• 用1-2 mL完全培养基重悬DI TNC1细胞，然后将其转移到培养瓶中，加入6-8 mL完全培养基。

• 将DI TNC1细胞的培养瓶放置于37°C培养箱中过夜，次日观察细胞的生长情况。

DI TNC1细胞的传代

• 传代时机：当DI TNC1细胞生长密度达到80%-90%时，进行传代操作。

• 用PBS缓冲液洗涤DI TNC1细胞，去除残留的培养基。

• 加入适量0.25%胰蛋白酶消化DI TNC1细胞，待细胞变圆且脱落时（约2-5分钟），加入完全培养基中和消化作用。

• 轻轻吹打以分散DI TNC1细胞，形成单细胞悬液。

• 将细胞悬液转移至新的培养瓶中，加入10 mL完全培养基。

• 将DI TNC1细胞置于37°C培养箱继续培养。

DI TNC1细胞的冻存

• 冻存液准备：使用90%胎牛血清和10% DMSO配制冻存液。

• 收集生长良好的DI TNC1细胞，离心并弃去上清液。

• 用冻存液重悬DI TNC1细胞，将悬液分装至冻存管中，每管约1 mL。

• 将冻存管置于-80°C冰箱中过夜，随后转移至液氮罐中保存。

注意事项

• 操作DI TNC1细胞时，需佩戴防护设备，因为该细胞系含有SV40病毒DNA序列。

• 定期观察DI TNC1细胞的状态，确保无污染并维持细胞的良好生长状态。