NG108-15细胞系是一种由小鼠神经母细胞瘤（N18TG2）和大鼠神经胶质瘤（C6-BU-1）通过融合技术获得的细胞系。NG108-15细胞最初是在1971年由德国科学家Bernd Hamprecht利用灭活的仙台病毒作为融合媒介建立。NG108-15细胞兼具小鼠神经细胞瘤和大鼠神经胶质瘤的特性，展示出神经元样形态，如突起和神经元结构，特别适用于研究神经分化和药物机制。

NG108-15细胞不仅能够在体外条件下维持良好的增殖能力，还能在特定诱导条件下分化为神经元样细胞。NG108-15细胞是研究神经系统功能、神经发育及神经退行性疾病的理想细胞模型。NG108-15细胞的另一显著特性是其在培养条件改变时表现出的适应性，例如当培养基酸化时，细胞会从贴壁状态转为悬浮状态，但补充新鲜培养基后，细胞可再次附着生长。

NG108-15细胞特性特征

• 在添加特定生长因子的刺激下，如二丁酰cAMP（dbcAMP），NG108-15细胞能够分化为具有神经元特性的细胞，并形成突触。

• 神经元特异性蛋白：分化后的NG108-15细胞表达多种神经元特异性蛋白，包括乙酰胆碱酯酶（AChE）、突触素（synaptophysin）、微管相关蛋白2（MAP2）和胆碱乙酰转移酶（ChAT）等。

• 中间丝蛋白：在未分化和分化的NG108-15细胞中均可检测到神经纤维蛋白200（NF200）和波磷酸化NF200（p-NF200），这些蛋白是神经元的重要标志物。

• 分化后的NG108-15细胞中，AChE mRNA的表达显著上调，表明其具备释放乙酰胆碱的功能。

• 其他相关基因如突触体相关蛋白25（SNAP-25）和烟碱型乙酰胆碱受体也在分化过程中被激活。

• 电生理特性：作为一种胆碱能细胞系，NG108-15细胞能够模拟电压门控钙通道的电生理变化，并参与研究神经递质的释放机制。

NG108-15细胞参数表

NG108-15小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞培养教程

NG108-15细胞复苏步骤

• 从液氮罐中取出冻存的NG108-15细胞，并立即将冻存管放入37℃水浴中快速解冻（约1-2分钟）。期间轻轻摇晃以均匀解冻。

• 将解冻的NG108-15细胞迅速转移至一个含有4-6 mL预温好的完全培养基的离心管中，混匀后轻轻离心（1000 RPM，3-5分钟）。

• 离心后小心弃去上清，避免扰动沉淀的NG108-15细胞，随后加入1-2 mL新鲜的完全培养基将细胞重悬。

• 将重悬的NG108-15细胞接种到含有6-8 mL完全培养基的T25培养瓶或10 cm培养皿中，轻轻摇匀后放入37℃培养箱中过夜。

NG108-15细胞传代

• 次日用显微镜检查NG108-15细胞，待细胞融合度达到80%-90%时可进行传代。

• 弃去培养基，用无钙、无镁的PBS缓冲液轻轻洗涤细胞1-2次。

• 加入适量的胰蛋白酶-EDTA溶液（0.25% 胰蛋白酶 + 0.53 mM EDTA），放入培养箱中消化1-2分钟，观察细胞形态变化，待NG108-15细胞变圆且开始脱落时终止消化。

• 用含有血清的完全培养基中和胰蛋白酶，轻轻吹打以帮助NG108-15细胞脱落，并将细胞转移至离心管中。

• 以1000 RPM离心4分钟，弃去上清后加入适量新鲜培养基重悬细胞。

• 根据需要将重悬的NG108-15细胞按1:2或1:3比例分瓶，并加入新鲜培养基，置于37℃培养箱中继续培养。

NG108-15细胞冻存

• 冻存液由90%胎牛血清和10% DMSO组成。

• 当NG108-15细胞达到80%-90%的融合度时，可进行细胞冻存。按传代步骤消化并收集细胞。

• 以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液后，用预冷的冻存液将细胞重悬。

• 将重悬后的NG108-15细胞等量分装至冻存管中，每管约1 mL。

• 冻存管先放入-80℃冰箱中逐渐冷冻24小时，然后转移至液氮罐中进行长期保存。