L6 大鼠骨骼肌成肌细胞培养资料
细胞特性: L6 细胞在培养基中可融合形成多核的肌管和横纹肌纤维。细胞融合的程度随着代数的增加而下降,因此建议在低代次阶段冷冻并重新克隆以选择融合能力强的细胞。
培养条件: 气相条件为空气 95% 和二氧化碳 5%,温度为 37 摄氏度,湿度为 70%-80%。培养基配方为 DMEM,含有 10% 胎牛血清和 1% 抗生素/抗菌素。
培养步骤:
细胞传代:
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弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
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加入 1-2ml 消化液(0.25% Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培养箱中消化 1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速停止消化并加入含 10% 血清的培养基终止消化。
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轻轻吹打细胞,脱落后吸出,在 1000RPM 条件下离心 8-10 分钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
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按照比例分到新的含 5-6 ml 培养液的新皿中或者瓶中。
复苏细胞: 将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入 5mL 培养基混合均匀。在 1000RPM 条件下离心 5 分钟,弃去上清液,补加 4-6mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入 6cm 皿中培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
特别注意事项:
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细胞在培养前 3 代时建议冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
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收到冻存细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与供应商联系。
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细胞接收后请在 10或 20X 显微镜下确认细胞状态,并拍照存档,作为后续售后的依据。
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所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护。
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L6 大鼠骨骼肌成肌细胞 是用于科研目的的,未通过直接用于活体动物和人的审核,也未通过用于活体诊断的审核。