nci-h69细胞（人小细胞肺癌细胞）

其他：表达标记: 胰岛素样生长因子II (IGF-II); 细胞角蛋白染色呈阳性。

NCI-H69人小细胞肺癌细胞源自一位55岁患有小细胞肺癌的白人男性的胸腔积液转移病灶。

nci-h69细胞模态数=76至78；范围=40到87，nci-h69细胞是一种非整倍体的人类男性细胞系。在这个亚四倍体细胞系中，注意到许多正常染色体的单体性和双体性；然而，注意到涉及许多缺失染色体的易位和缺失，这些染色体重排似乎是稳定的，通常是成对的。共鉴定出12条标记染色体，包括：der（16）t（1；16）（q21；q23）、der（22）t（4；22）（q12；q13）、dr（12）t（11；12）（q23；p12）、del（17）（p11）、der。

Nci-h69细胞特征、特性

分子特征

癌症基因表达: myc+, myb+, fes+, fms+, raf+, ras+; N-myc基因扩增,mRNA和蛋白质表达; C-myc mRNA表达水平较低,但不表达蛋白质。
其他基因表达: c-myb, v-fes, v-fms, c-raf 1, Ha-ras, Ki-ras和N-ras mRNA均有表达。
表达标记: 胰岛素样生长因子II (IGF-II); 细胞角蛋白染色呈阳性。
同工酶表达: AK-1,1; ES-D,2; G6PD,B; GLO-I,1-2; Me-2,1; PGM1,2; PGM3,1。

细胞特性

生长特性: 悬浮生长,形成细胞聚团; 可适应在摇瓶或旋转瓶系统中生长; 细胞聚集生长,导致细胞计数不准确。
形态特征: 保留小细胞癌的形态和超微结构; 具有APUD (Amine Precursor Uptake and Decarboxylation) 细胞特征。
致瘤性: 在裸小鼠身上可致瘤; 形成的肿瘤具有典型小细胞癌组织学特征。
染色体特征: 非整倍体。
体外特性: 在软琼脂中会形成集落。

其他特征

神经内分泌标志物表达: 神经元特异性烯醇化酶(NSE), 突触素(SYN), 嗜铬粒蛋白A(CgA)。
神经肽表达: 促肾上腺皮质激素(ACTH), 生长抑素(SS)。
基因突变: TP53基因突变; 可能存在RB1基因失活。
药物敏感性: 对某些化疗药物如顺铂、依托泊苷等表现出一定的敏感性; 可能发展出耐药性。
转移潜能: 具有一定的转移潜能。

Nci-h69细胞参数表

细胞名称	nci-h69细胞（人小细胞肺癌细胞）
细胞别名	NCI-H69; NCI-H-69, H69, NCIH69
细胞来源	55岁男性患者的胸腔积液
组织来源	肺
建立机构	美国国家癌症研究所(NCI)
生长/细胞形态	悬浮生长,形成细胞聚团；淋巴母细胞样形态
超微结构	保留小细胞癌的超微结构
APUD特征	具有APUD细胞特征
基础培养基	RPMI-1640 + 10% FBS + 1% P/S
培养环境	培养温度 37°C；CO2浓度 5%
冻存条件	55%基础培养基,40%FBS,5%DMSO,液氮保存
致瘤性	在裸小鼠身上可致瘤
转移潜能	具有一定的转移潜能
染色体特征	非整倍体
软琼脂克隆形成	可形成集落
细胞角蛋白染色	阳性
神经内分泌标志物	NSE, SYN, CgA 阳性
神经肽表达	ACTH, SS 阳性
其他标志物	IGF-II 阳性
表面标志物	NCAM (CD56) 阳性
癌基因表达	myc+, myb+, fes+, fms+, raf+, ras+
N-myc/C-myc表达	N-myc基因扩增,mRNA和蛋白质表达 / C-myc mRNA低表达,蛋白质不表达
其他基因表达	c-myb, v-fes, v-fms, c-raf 1, Ha-ras, Ki-ras, N-ras mRNA表达
TP53/RB1	TP53突变 / RB1可能失活
同工酶表达	AK-1,1; ES-D,2; G6PD,B; GLO-I,1-2; Me-2,1; PGM1,2; PGM3,1
药物敏感性	对顺铂、依托泊苷等有一定敏感性；可能发展耐药性
研究用途	小细胞肺癌机制研究,药物筛选,转移研究
计数/培养注意	细胞聚集生长,计数可能不准确；需要特别注意悬浮生长特性
使用限制	仅用于科研目的,不可用于临床或其他用途

培养教程

nci-h69人小细胞肺癌细胞培养教程

复苏步骤

从液氮中取出冻存的NCI-H69细胞，迅速放入37°C水浴中融化。
将融化的NCI-H69细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中。
以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。
用预热的完全培养基重悬NCI-H69细胞。
将NCI-H69细胞悬液转移到培养瓶中，放入37°C、5% CO2培养箱内培养。

培养注意事项

NCI-H69细胞以悬浮方式生长，会形成细胞聚团。
在培养NCI-H69细胞2-4小时后需观察细胞状态。
由于NCI-H69细胞聚集，计数可能不准确，需特别注意。
在操作NCI-H69细胞时要严格遵循无菌操作规程，避免污染。
培养基应避免长时间暴露在室温或高温环境中。
NCI-H69细胞仅用于科研目的，并在有效期内使用。

传代方法

收集NCI-H69细胞悬液，以1000 rpm离心5分钟。
弃去上清液，用新鲜的完全培养基重悬NCI-H69细胞。
按照1:2到1:3的比例进行NCI-H69细胞的传代。
通常每3-4天传代一次，或当NCI-H69细胞密度达到80-90%时进行传代。

冻存方法

收集对数生长期的NCI-H69细胞。
制备冻存液（55%基础培养基，40% FBS，5% DMSO）。
将NCI-H69细胞悬浮在冻存液中，转移到冻存管中。
使用程序降温盒或细胞冻存盒，将NCI-H69细胞缓慢降温至-80°C。
24小时后将NCI-H69细胞转移到液氮中进行长期保存。

其他注意事项

污染检测：为确保培养基无细菌和真菌污染，应使用无菌操作技术，并在生物安全柜中进行所有操作。使用经过灭菌的培养基和器具，定期对培养基进行细菌和真菌检测，可使用培养法或PCR方法。
血清和抗生素的添加：在无菌条件下，将适量的FBS和P/S加入到基础培养基中，轻轻混匀以避免产生气泡。如果使用专用培养基，通常已包含必要的血清和抗生素，通常无需额外添加。

培养建议

NCI-H69细胞是悬浮生长的细胞，容易形成细胞聚团，传代时需要离心收集NCI-H69细胞，注意不可直接倒掉培养液。
使用摇瓶或旋转瓶系统培养NCI-H69细胞可能会提高细胞的生长效果。
培养条件应保持在37°C和5%的CO2浓度，以确保NCI-H69细胞的最佳生长环境。