来源:肺;大细胞肺癌患者的淋巴结
细胞特征:贴壁细胞 , 上皮细胞样
培养基:生长培养基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
其他:NCI-H661细胞表达特征:角蛋白表达阳性、波形蛋白表达阳性、p53 mRNA高表达
NCI-H661是1982年来自一名43岁白人男性大细胞肺癌患者的淋巴结中建立的人大细胞肺癌细胞系,可用于癌症研究。
NCI-H661细胞为超六倍体,具有模态数142,范围在130到153之间。每个细胞有70多条标记染色体,包括t(1p10q)、del(1)(q11/q12)、6q+、2q+、der(20)t(12;20)(q11;q13),其中一些标记物在每个细胞中存在2到3个拷贝。大多数细胞也有5到10个微染色体(稳心样)。结构正常的N2、N4和N9染色体缺失,同时存在两个拷贝的X染色体和多个拷贝的Y染色体。
NCI-H661细胞具有以下特性和特征
NCI-H661细胞分子特征
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角蛋白和波形蛋白纤维染色呈阳性
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神经丝三联体蛋白染色呈阴性
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p53 mRNA表达水平明显高于正常肺细胞
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缺乏产生粘液和鳞状分化的亚显微结构和生化证据
NCI-H661细胞其他特征
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NCI-H661细胞表达特征:角蛋白表达阳性、波形蛋白表达阳性、p53 mRNA高表达
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基因特征:可能存在p53基因的点突变或小的变异,但没有出现总体性的结构DNA崎变
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NCI-H661细胞倍增时间约60小时,生长速度相对较慢
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NCI-H661细胞形态呈上皮细胞样,生长特性为贴壁生长
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同工酶:AK-1,1;ES-D,1;G6PD,B;GLO-I,1-2;Me-2,0;PGM1,1;PGM3,1
NCI-H661细胞参数表
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细胞名称
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NCI-H661人大细胞肺癌细胞
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细胞别称
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NCI-H661; h661, H-661, NCIH661
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ATCC编号
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HTB-183
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组织来源
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人肺
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疾病类型
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大细胞肺癌
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建系年份
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1982年
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患者信息
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43岁男性
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样本来源
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胸腔积液
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生长形态
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贴壁生长 / 上皮细胞样
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倍增时间
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约60小时
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细胞代数
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10代以内
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生物安全等级
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1级
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蛋白表达
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角蛋白:阳性;波形蛋白:阳性;神经丝三联体蛋白:阴性
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p53 mRNA表达
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高于正常肺细胞
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其他特征
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粘液产生:无证据;鳞状分化:无证据
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p53基因
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可能存在点突变或小的变异
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培养基
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RPMI 1640 + 10% 胎牛血清 (FBS) + 青霉素/链霉素 (PS)
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培养环境
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温度:37°C;CO2浓度:5%;气相:95%空气 + 5%二氧化碳
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传代密度
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细胞密度达80%-90%
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传代比例
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1:02
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冻存液
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无血清冻存液 ; 液氮储存
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检测结果
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支原体检测:阴性;STR鉴定:正确
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用途/限制
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仅限于科学研究 / 不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
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培养教程
NCI-H661人大细胞肺癌细胞培养教程
NCI-H661细胞复苏
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从液氮中取出NCI-H661细胞冻存管,迅速置于37°C水浴中快速解冻。
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将NCI-H661细胞悬液转移到含有预热完全培养基的离心管中。
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以1000 rpm离心5分钟,弃去上清。
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用新鲜完全培养基重悬NCI-H661细胞,并转移到培养瓶中。
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NCI-H661细胞接种密度约为2-3 × 10^4 cells/cm²。
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将NCI-H661细胞置于37°C、5% CO2培养箱中培养。
NCI-H661细胞日常培养
NCI-H661细胞传代
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当NCI-H661细胞密度达到80%-90%时进行传代。
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用PBS洗涤NCI-H661细胞层1-2次。
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加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液,在37°C消化2-3分钟。
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加入完全培养基终止消化,轻轻吹打使NCI-H661细胞分散。
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以1000 rpm离心5分钟,弃去上清。
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用新鲜完全培养基重悬NCI-H661细胞,并按1:2的比例进行传代。
NCI-H661细胞冻存
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收集对数生长期的NCI-H661细胞。
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制备冻存液:90%完全培养基 + 10% DMSO。
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调整NCI-H661细胞密度至1-2 × 10^6 cells/mL。
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将NCI-H661细胞悬液分装到冻存管中。
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使用程序降温盒或梯度降温,最终转移到液氮中长期保存。
NCI-H661细胞培养注意事项
特殊说明
常见问题解答
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传代比例对NCI-H661细胞实验结果的影响:
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传代比例为1:2有助于保持适当的NCI-H661细胞密度,确保细胞正常生长。
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过高的传代比例可能导致NCI-H661细胞密度过低,生长缓慢,影响细胞活力。
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过低的传代比例可能导致NCI-H661细胞过度密集,影响细胞形态和代谢特性。
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确保NCI-H661细胞健康状态的方法:
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定期观察NCI-H661细胞形态,保持上皮细胞样特征。
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使用10代以内的NCI-H661细胞,避免长期传代。
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定期进行支原体检测,确保无污染。
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严格遵守无菌操作规程。
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不同培养基对NCI-H661细胞生长特性的影响:
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推荐使用RPMI 1640基础培养基,添加10% FBS和PS。
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在这种标准培养条件下,NCI-H661细胞的倍增时间约为60小时。
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NCI-H661细胞对化疗药物的敏感性:
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具体化疗药物的敏感性信息可能需要进一步实验验证。
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NCI-H661细胞可能对肺癌常用化疗药物表现出特定的反应模式。
STR鉴定及相关
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Amelogenin
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X,Y
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CSF1PO
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10
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D2S1338
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17
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D3S1358
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15,16 (ATCC=HTB-183; PubMed=25877200)
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16 (CCRID)
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D5S818
|
11
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D7S820
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8,10
|
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D8S1179
|
10
|
|
D13S317
|
11
|
|
D16S539
|
12
|
|
D18S51
|
11 (CCRID)
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11,14 (ATCC=HTB-183)
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D19S433
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13,14
|
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D21S11
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31,33.2
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FGA
|
20
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Penta D
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11,13
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|
Penta E
|
12,13
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TH01
|
8
|
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TPOX
|
8
|
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vWA
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17
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