H4细胞（人脑神经胶质瘤细胞）

H4人脑神经胶质瘤细胞系是1973年从一名37岁患有神经胶质瘤的白人男性大脑中分离的上皮细胞系。

H4细胞具有超三倍体特性，模式染色体数为73，范围=63到78，占26%的细胞中出现，但也有24%的细胞展示出75条染色体。少数细胞（0.4%）展示出更高的染色体倍性。
在所有检查的中期细胞中，至少有16条标记染色体是共同的，包括成对的del(2)(p2209)和del(9)(p22)，以及单条der(14)t(1;14)(p22;q22)、del(3)(p2501)、del(5)(p13)、del(7)(q11)等。N7和N21在每个细胞中出现四个或更多拷贝。大多数细胞含有两条X染色体和两条Y染色体。

H4细胞特性特征

H4细胞具有修复MNNG（N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍）损伤5型腺病毒的能力
同工酶表达：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；Me-2，0；PGM1，1-2；PGM3，1
H4细胞致瘤特性已被屏蔽，接种动物通常不产生肿瘤结节
在免疫抑制小鼠中不致瘤
H4细胞适合作为转染宿主、可用于神经科学研究

H4细胞参数表

细胞名称	H4细胞（人脑神经胶质瘤细胞）
英文名称	H4; H-4
种属	人
组织来源	脑组织
年龄/性别	37岁男性
细胞形态	上皮细胞样
生长特性	贴壁
建系时间	1973年
培养基	DMEM高糖 + 10% FBS + 1% P/S
培养环境	37℃；CO2浓度 5%
换液频率	每周2～3次
传代比例/周期	1:2 或 1:4 / 2-3天
传代方法	消化3分钟
冻存液	基础培养基 + 5% DMSO + 10% FBS
致瘤性	致瘤特性已被屏蔽，一般不产生肿瘤结节
特殊能力	具有修复MNNG损伤5型腺病毒的能力
无菌检测	细菌、酵母、支原体检测均为阴性
同工酶	AK-1, 1; ES-D, 1; G6PD, B; GLO-I, 2; Me-2, 0; PGM1, 1-2; PGM3, 1
应用	神经科学研究，适合作为转染宿主

培养教程

H4人脑神经胶质瘤细胞培养教程

H4细胞复苏

从液氮中取出冻存的H4细胞，迅速放入37℃水浴中解冻，轻轻摇晃使其快速融化。
解冻后立即将H4细胞悬液转移至含有10 ml预热的培养基的离心管中，1000 rpm离心5分钟。
吸去上清，加入10 ml新鲜培养基，轻轻吹打混匀。
将H4细胞悬液转移至T25培养瓶中，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。

H4细胞培养

换液：每2-3天换液一次，即使培养基没有变黄。换液时轻轻侧过培养瓶，不要使H4细胞飘起来，用巴氏吸管轻轻吸取部分上清弃去，补加等体积的新鲜培养基继续培养。
传代比例：1:2或1:4；传代周期：2-3天
吸去旧培养基，加入适量的PBS洗涤H4细胞。
吸去PBS，加入适量的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃消化1-3分钟，观察H4细胞是否脱落。
轻轻敲打培养瓶，使H4细胞完全脱落，加入新鲜培养基终止消化。
将H4细胞悬液转移至离心管中，1000 rpm离心5分钟。
吸去上清，加入新鲜培养基重悬H4细胞，按比例分装至新的培养瓶中。

H4细胞冻存

冻存液配方：基础培养基 + 5% DMSO + 10% FBS
收集对数生长期的H4细胞，1000 rpm离心5分钟。
吸去上清，加入冻存液重悬H4细胞，细胞密度为1×10⁶ cells/ml。
将H4细胞悬液分装至冻存管中，每管1 ml。
逐步降温：先置于4℃ 30分钟，然后转移至-80℃ 4小时，最后转移至液氮中长期保存。

注意事项

H4细胞对氧气、密度和养分非常敏感，需保持勤换液和传代，避免H4细胞过度密集。
培养基尽量现配，配好的培养基最好在两周内用完，因为叶酸不稳定易分解。
换液时，避免吹打过度，H4细胞对离心和吹打比较敏感，离心和反复吹打会影响H4细胞状态。

常见问题及解决方法

H4细胞不贴壁：检查培养基成分和培养条件，确保胰蛋白酶消化时间适当。
H4细胞生长缓慢：检查CO2浓度、培养温度和培养基是否新鲜。
H4细胞污染：定期进行无菌检测，确保操作环境和耗材的无菌性。