SK-N-SH细胞（人神经母细胞瘤细胞）

SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞系是应用于细胞介导的细胞毒性试验中的靶细胞系，也是一种理想的转染宿主。SK-N-SH细胞来源于一名4岁女性患者的神经母细胞瘤，该肿瘤已转移至骨髓，由 J.L. Bieder 博士建立。

SK-N-SH细胞系是超二倍体人类雌性（XX），具有47条染色体。正常的N9和N22染色体是单染色体，每条染色体的一个拷贝结构上发生改变，形成了9q+和22q+标记染色体。此外，N7染色体是三体，其中一个拷贝带有额外条带，形成标记染色体，这种情况是由R.C. Seeger描述的。可能存在部分转移到N9和N22染色体的q臂的现象。

SK-N-SH细胞特征特性

SK-N-SH细胞形态:上皮细胞样,贴壁生长、倍增时间:约44小时、半贴半悬浮生长；
多巴胺-β-羟基酶水平较高、表达纤溶酶原激活物、β-淀粉样肽处理后M-CSF表达增加
抗原表达：血型:A型,Rh阳性
同工酶表达：AK-1, 1; ES-D, 1; G6PD, B; GLO-I, 1; Me-2, 2; PGM1, 1; PGM3, 1
功能特性：在细胞介导的细胞毒性试验中可用作靶细胞系、适合作为转染宿主
SK-N-SH细胞具有较强的成瘤性和转移性(在动物实验中观察到)

SK-N-SH细胞参数表

细胞名称	SK-N-SH细胞（人神经母细胞瘤细胞）
细胞名称/别称	SK N SH; SKN-SH; SK-NSH; SKNSH; NSH
来源信息	4岁女性患者的脑神经母细胞瘤,转移至骨髓; 由J.L. Bieder博士建系
形态生长特性	上皮细胞样,贴壁生长; 半贴半悬浮生长
倍增时间	约44小时
抗原/基因表达	A型血; Rh阳性; 纤溶酶原激活物; β淀粉样肽处理后M-CSF表达增加
同工酶	AK-1, 1; ES-D, 1; G6PD, B; GLO-I, 1; Me-2, 2; PGM1, 1; PGM3, 1
培养基	87% MEM + 10% FBS + 1% NEAA + 1% GlutaMAX + 1% P/S
培养环境	37°C; 95%空气 + 5%二氧化碳
传代	比例1:2至1:6; 频率每周2-3次
冻存液/方式	90%完全培养基 + 10% DMSO 或基础培养基 + 5%DMSO + 20%FBS; 液氮储存
生物安全等级	1级
检测结果	细菌、酵母、支原体、HIV、乙肝、丙肝均阴性
用途	细胞毒性试验靶细胞; 神经科学研究; 转染宿主
其他特性	在裸鼠体内具有强成瘤性和转移性

培养教程

SK-N-SH人神经母细胞瘤细胞培养教程

细胞复苏

解冻：将冻存管中的SK-N-SH细胞从液氮中取出，立即置于37°C水浴中迅速解冻。
转移：将解冻后的SK-N-SH细胞悬液转入含10ml预热培养基的15ml离心管中。
离心：以1000rpm离心5分钟，弃去上清液。
重悬：用5ml新鲜培养基重悬SK-N-SH细胞，然后转移至T25培养瓶中。
培养：将T25培养瓶置于37°C，5% CO2培养箱中培养。

细胞传代

传代密度：当SK-N-SH细胞密度达到70-80%时，进行传代。
洗涤：弃去旧培养基，用PBS洗涤1-2次。
消化：加入适量胰蛋白酶-EDTA消化液，37°C消化2-3分钟。
终止消化：加入含血清的培养基终止消化，轻轻吹打收集SK-N-SH细胞。
离心：以1000rpm离心5分钟，弃去上清。
重悬和接种：用新鲜培养基重悬SK-N-SH细胞，按1:2至1:6的比例接种到新培养瓶中。

细胞冻存

收集细胞：选择对数生长期的SK-N-SH细胞。
配制冻存液：使用90%完全培养基 + 10% DMSO。
细胞浓度：调整SK-N-SH细胞浓度至1-2×10^6个/ml。
分装：将细胞悬液分装入冻存管，置于-80°C冰箱过夜。
长期保存：次日将冻存管转入液氮中保存。

注意事项

细胞形态：观察SK-N-SH细胞是否保持正常的上皮样贴壁生长。
生长密度：在SK-N-SH细胞密度达到70-80%时进行传代。
培养基颜色：观察培养基颜色变化，反映pH值和SK-N-SH细胞的代谢状态。
污染情况：定期检查是否有细菌或真菌污染。
细胞活性：评估SK-N-SH细胞的生长状态和活力。
贴壁情况：确保SK-N-SH细胞正常贴壁生长。
无菌操作：所有操作应在无菌条件下进行，以避免污染SK-N-SH细胞。
传代间隔：不宜过长，以免影响SK-N-SH细胞的活性。
冻存和复苏速度：操作需迅速，以减少DMSO对SK-N-SH细胞的毒性作用。

培养时间

SK-N-SH细胞的倍增时间约为44小时，通常从接种到传代需要3-4天。具体时间可能因实验需求和培养条件而有所不同。

不同温度下的生长情况

SK-N-SH细胞的最佳生长温度为37°C。温度的偏离会影响SK-N-SH细胞的生长速度和状态。