D283 Med细胞系由Friedman等人在1985年建立，源自一名6岁患有神经管细胞瘤且有腹腔转移的白人男性小孩的腹水细胞。D283 Med细胞是一种上皮样细胞系。

D283 Med细胞系特性

• 源自6岁白人男性小孩的神经管细胞瘤腹水细胞和腹膜转移，用于研究人脑髓母细胞瘤。

• 裸鼠实验中可以形成连续移植的颅内和皮下肿瘤。

• 具有特定的染色体核型：45, XY, -7, -8, -17, -20, der(20)t(1;20)(q12;q13), 8q+, 17p+。

• 基因表达：谷氨酰胺合成酶、神经元特异性烯醇化酶阳性，但不表达胶质纤维酸性蛋白和S100蛋白。

• 表达SCLC（小细胞肺癌）的生化标志物：神经元特异性烯醇化酶、肌酸激酶的脑同工酶、L-DOPA脱羧酶和蛙皮素样免疫反应性

• 表达同工酶：AK-1, ES-D, G6PD, PGM1, PGM3。

D283 Med细胞系参数表

D283Med人脑髓母细胞瘤细胞系培养

传代方法

1. 收集细胞：

• 将培养瓶中的悬浮细胞收集到离心管中。

• 用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次，PBS润洗后细胞会脱落，PBS也要回收到离心管中。

2. 消化细胞：

• 加入0.25%（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2 mL，T75瓶2-3 mL），置于37°C培养箱中消化1-2分钟。

• 在显微镜下观察细胞消化情况，细胞大部分变圆并脱落后，轻敲培养瓶并加入3-4 mL含10% FBS的培养基来终止消化。

3. 离心：

• 将收集到的悬浮细胞、PBS清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000 rpm离心5分钟，弃去上清。

4. 重悬：

• 加入1-2 mL培养基重悬混匀，将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中，添加6-8 mL新完全培养基以保持细胞的生长活力。

• 后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

冻存步骤

1. 细胞收集和消化：

• 按照传代过程收集和消化细胞。

• 使用血球计数板计数，决定细胞的冻存密度，一般为1×10^6~1×10^7个活细胞/mL。

2. 离心和重悬：

• 1000 rpm离心3-5分钟，去掉上清。

• 用配制好的细胞冻存液重悬细胞，每1 mL冻存液含1×10^6~1×10^7个活细胞，分配到冻存管中。

3. 冻存和储存：

• 标注好名称、代数、日期等信息。

• 将细胞置于程序降温盒中，在-80°C冰箱中过夜，然后转入液氮容器中储存。