NCIH596人肺腺鳞癌细胞培养教程

1. NCIH596细胞复苏

• 从液氮中取出NCIH596细胞冻存管，在37°C水浴中快速解冻1-2分钟。

• 解冻后立即将NCIH596细胞悬液转移到含有预热完全培养基的离心管中。

• 轻柔离心（800rpm，5分钟），去除冻存保护剂DMSO。

• 用预热的完全培养基重悬NCIH596细胞，避免剧烈震荡。

2. NCIH596细胞接种

• 将NCIH596细胞悬液转移到25cm²培养瓶中。

• 加入适量完全培养基，使总体积达到5-7mL。

• 轻轻摇晃培养瓶，使NCIH596细胞均匀分布。

• 将培养瓶放入37°C，5% CO2培养箱中。

3. NCIH596细胞培养

• 每1-2天观察NCIH596细胞生长状态，必要时更换培养基。

• 当NCIH596细胞汇合度达到80-90%时进行传代。

4. NCIH596细胞传代

• 弃去旧培养基，用PBS轻轻冲洗NCIH596细胞1-2次。

• 加入适量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C消化3-5分钟。

• 轻轻拍打培养瓶，观察NCIH596细胞脱落情况。

• 加入等体积完全培养基终止消化。

• 800rpm离心5分钟，弃上清。

• 用新鲜完全培养基重悬NCIH596细胞。

• 按1:2或1:3的比例接种到新的培养瓶中。

5. NCIH596细胞培养基更换

• 每2-3天更换一次培养基。

• 弃去旧培养基，加入新鲜预热的完全培养基。

6. NCIH596细胞冻存

• 收集对数生长期的NCIH596细胞。

• 制备冻存液（90%完全培养基 + 10% DMSO）。

• 调整NCIH596细胞浓度至1-2×10^6 cells/mL。

• 将NCIH596细胞悬液分装到冻存管中，每管1mL。

• 使用程序降温盒，将NCIH596细胞缓慢降温至-80°C。

• 24小时后转移到液氮中长期保存。

注意事项

• 无菌操作: 在整个NCIH596细胞培养过程中，务必保持无菌环境，以防止细胞污染。

• 细胞密度: 避免NCIH596细胞过度生长或长期处于高密度状态，以确保良好的细胞状态和形态。

• 细胞形态观察: 定期检查NCIH596细胞形态和生长状态，及时发现和处理异常情况。

• 支原体检测: 定期进行支原体检测，确保NCIH596细胞无污染。

• 细胞特性: NCIH596细胞为上皮样形态，贴壁生长，表现出鳞状分化标志，如谷氨酰胺转移酶活性和被膜素产生。