AU565细胞系是一种上皮样人乳腺癌细胞，从一名43岁高加索女性的乳腺浸润性导管癌患者的胸腔积液中分离。AU565细胞系因其HER2/neu癌基因的过表达特性，常被用于乳腺癌相关的基础研究和药物筛选。与SK-BR-3细胞系一样，AU565细胞系也是从同一名患者的样本中获得。患者本身接受过放射治疗、类固醇、环磷酰胺以及5-氟尿嘧啶的治疗，血型为A+。AU565细胞可用作研究癌症细胞分化的细胞生长模型，应用于HER2/neu相关的肿瘤研究，尤其是在药物研发和靶向治疗领域。

AU565细胞系特性特征

癌基因表达

• HER2/neu：过度表达，属于HER2阳性细胞系。

• HER3和HER4：也呈阳性表达。

• p53：该基因在AU565细胞中也表达。

其它表达

• 转移性：AU565细胞系来源于胸腔积液，具有转移特性。

• 标记物表达：表达表皮生长因子（EGF），这与肿瘤的生长和分化相关。

AU565细胞可以通过多种方法诱导分化

• 使用霉酚酸（MPA）、佛波醇12-肉豆蔻酸13-乙酸酯（PMA）、视黄酸（RA）或针对HER-2/neu蛋白的TA-1单克隆抗体处理。

• 使用Neu分化因子（NDF）处理可诱导成熟表型，其特征是细胞形态的变化，从紧凑的细胞核和较薄的胞质转变为扁平的细胞核

AU565细胞系参数表

AU565人乳腺癌细胞系培养教程

收货及初步处理

• 状态检查：收到AU565细胞后，首先检查包装和培养瓶的完整性，确保没有漏液或污染情况。如发现问题，及时记录并拍照留证。

• 培养准备：去除封口膜，将AU565细胞培养瓶直接置于37℃培养箱中静置2-4小时，使细胞适应环境，恢复稳定状态。

• 更换培养基：弃去原有运输中的培养基，加入6 mL RPMI-1640培养基（含10%胎牛血清），轻轻混匀后，继续在37℃、5% CO₂培养箱中培养。

AU565细胞复苏

• 迅速将冻存管（含1 mL AU565细胞悬液）从液氮中取出，并立即置于37℃水浴中，保持摇晃解冻，整个过程不应超过2分钟。

• 解冻后，用4 mL预热的完全培养基稀释AU565细胞悬液，轻轻混匀。

• 将稀释后的AU565细胞悬液在1000 rpm下离心3-4分钟，以去除DMSO和其他残留物。

• 弃去上清液，注意避免吸取AU565细胞沉淀。

• 加入1-2 mL完全培养基，轻轻吹打AU565细胞，确保其均匀分布。

• 将重悬后的AU565细胞转移至T25培养瓶中，加入适量的培养基（如8 mL），并置于37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。培养基的体积应根据培养瓶大小适量调整。

AU565细胞传代

• 传代时机：当AU565细胞密度达到80%-90%时，需要进行传代，以确保细胞继续保持良好的生长状态。

• 弃去旧的培养基，用不含钙、镁的PBS（磷酸盐缓冲液）清洗AU565细胞1-2次，去除残留培养基和代谢废物。

• 加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，轻轻摇晃培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟。

• 在显微镜下观察AU565细胞是否变圆、脱落。当大部分细胞开始松散时，迅速轻敲瓶壁，加入适量的完全培养基终止消化反应。

• 将细胞悬液在1000 rpm下离心4分钟，弃去上清液。

• 加入6-8 mL完全培养基重悬AU565细胞，根据实际需要按1:2的比例进行传代。

• 将重悬后的AU565细胞分装至新的培养瓶中，按需求加入适量培养基（如T25瓶中加入8 mL），继续在37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

AU565细胞冻存

• 冻存时机：当AU565细胞生长状态良好且需要长期保存时，建议进行冻存。

• 弃去培养基，用PBS清洗AU565细胞1次。

• 加入1 mL胰蛋白酶消化AU565细胞，待细胞变圆脱落时，加入1 mL含10%胎牛血清的培养基终止消化。

• 在1000 rpm条件下离心4分钟，弃去上清液。

• 加入冻存液（90%胎牛血清+10%DMSO），轻轻混匀，确保AU565细胞分散均匀。

• 每支冻存管加入1 mL AU565细胞悬液，并做好详细标识，包括细胞系名称、冻存日期、传代次数等。

• 将冻存管放入程序降温盒中，逐渐降低温度至-80℃，之后可转移至液氮中长期保存。