T47D细胞（人乳腺管癌细胞）

T47D人乳腺导管癌细胞系源自54岁女性患者（患有乳腺浸润性导管癌）的胸腔积液中分离的上皮细胞。T47D细胞系自1979年由I. Keydar首次分离，广泛应用于癌症研究。

T-47D细胞属于亚二倍体人类细胞系，其模式染色体数为65，出现率为50%，多倍体率为0.8%。大多数细胞含有18条标记染色体，其中7条为成对存在，而11条为单拷贝。常见的标记染色体包括t(8q14q)、t(9q17q)和t(10q17p)等。T47D细胞缺乏正常的N7、N9和N10染色体，但通常具有4个N11拷贝。染色体显带分析未显示Y染色体的存在，而双微体（DM）虽出现，但频率很低。

T47D细胞特征特性

雌激素受体阳性（ER+）：表达雌激素受体，对雌激素敏感。
孕酮受体阳性（PR+）：表达孕酮受体。
雄激素受体阳性（AR+）：表达雄激素受体。
糖皮质激素受体阳性：表达糖皮质激素受体。
降钙素表达：细胞表达降钙素及其受体。
催乳素表达：细胞表达催乳素。
WNT7B癌基因表达：表达WNT7B癌基因，可能与其恶性特性相关。
生长特性：贴壁生长，形态为上皮细胞样。
致瘤性：T47D细胞能在软琼脂中形成菌落。
转移性：源自胸腔积液，具有转移潜能。
同工酶谱：AK-1，1；ES-D，2；G6PD，B；GLO-I，1-2；PGM1，1；PGM3，1
分化的T-47D上皮细胞含有17-β-雌二醇、其他类固醇和降钙素的细胞质连接和受体。

T47D细胞参数表

细胞名称	T47D细胞（人乳腺管癌细胞）
别称	ATCC HTB-133, T-47-D, T47-D, T47D:A
细胞类型	人乳腺导管癌细胞
组织来源	乳腺
具体来源	54岁女性乳房侵入性导管癌患者的胸腔积液
建系时间	1979年
建系者	I. Keydar
细胞形态	上皮细胞样
生长特性	贴壁生长
激素受体	雌激素受体 (ER) 阳性，孕酮受体 (PR) 阳性，不受雌二醇调节，雄激素受体 (AR) 阳性，糖皮质激素受体阳性
其他受体	17β-雌二醇受体、其他类固醇受体、降血钙素受体
基因	WNT7B、降钙素、催乳素
蛋白	E-cadherin、Cytokeratin 8/18
同工酶谱	AK-1,1; ES-D,2; G6PD,B; GLO-I,1-2; PGM1,1; PGM3,1
致瘤性	在软琼脂中形成菌落
转移性	源自胸腔积液，具有转移潜能
细胞质连接	存在
培养基	DMEM或RPMI-1640，10% 胎牛血清 (FBS)
培养温度	37°C，5% CO₂，70%-80%湿度
贴壁时间	48小时内
传代比例	1:2 至 1:4
消化酶	0.25% 胰蛋白酶-0.53mM EDTA
细胞密度	>1x10^6 细胞数
冻存培养基	完全培养基 + 10% DMSO
冻存温度	液氮 (-196°C)
敏感性	雌激素敏感，抗雌激素具有极强的抗性，溴化去氧尿苷和丁酸钠可能抑制
生物安全	1级
主要用途	乳腺癌研究、药物筛选、激素相关研究、异种移植研究
保藏机构	ATCC; HTB-133 DSMZ; ACC-739 ECACC; 85102201
细胞代数	10代以内
包装形式	T25瓶或1mL冻存管
培养特点	传代前期48小时内以圆形发亮的贴壁状态存在，培养基颜色可能不发生大变化
首次传代	T25培养瓶1:2传代

培养教程

T-47D人乳腺管癌细胞培养教程

T-47D细胞接收后的处理

消毒：收到T-47D细胞后，用75%酒精消毒培养瓶外壁。
静置：将T25培养瓶放置在37℃的培养箱中约2-3小时。
检查：用4X或5X显微镜检查T-47D细胞状态，并拍摄细胞状态照片（10X、20X各2-3张）及培养瓶外观照片。若发现培养瓶破损、液体溢出或T-47D细胞污染，请及时拍照并联系供应商。
观察贴壁情况：在显微镜下观察T-47D细胞生长和贴壁情况。若细胞密度低于60%，则去除培养瓶中的培养基，离心回收未贴壁的T-47D细胞，重悬后加入6-8mL新配制的完全培养基继续培养。若细胞密度达到70%-80%，则进行传代处理。

T-47D细胞复苏

从液氮中取出T-47D细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中摇晃解冻至冰块完全融化。
用75%酒精消毒冻存管外壁，并置于超净台中操作。
将T-47D细胞悬液转移到含9mL预热完全培养基的15mL离心管中，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，加入1mL预热完全培养基重悬T-47D细胞，转移到T25培养瓶中，并补充完全培养基至5mL。
将T-47D细胞培养瓶置于37℃、5% CO₂培养箱中，24小时后更换新鲜培养基。

T-47D细胞传代

当T-47D细胞密度达到70%-80%时，准备进行传代。
吸去培养基，并用PBS轻轻洗涤T-47D细胞一次。
加入0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液，37℃孵育约3-5分钟，观察T-47D细胞脱落情况。
加入预热的完全培养基终止消化，并轻轻吹打T-47D细胞使其完全脱落。
将T-47D细胞悬液转移至15mL离心管中，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，加入适量完全培养基重悬T-47D细胞，按1:2至1:4比例接种到新的培养瓶中。
补充完全培养基至适量，将T-47D细胞培养瓶置于培养箱中继续培养。

T-47D细胞冻存

当T-47D细胞生长良好且密度适宜时，进行冻存。
吸去培养基，并用PBS轻轻洗涤T-47D细胞一次。
加入0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液，37℃孵育约3-5分钟，观察T-47D细胞脱落情况。
加入预热的完全培养基终止消化，轻轻吹打T-47D细胞使其完全脱落。
将T-47D细胞悬液转移至15mL离心管中，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，加入冻存液（90%完全培养基+10%DMSO）重悬T-47D细胞。
将T-47D细胞悬液分装到冻存管中，每管1mL。
将冻存管置于程序降温盒中，-80℃预冻过夜后转移至液氮中长期保存。

注意事项

传代前48小时内，T-47D细胞多为圆形发亮状态，培养基颜色变化不明显时避免移动细胞。
收到T-47D细胞后，运输用培养基不能再用来培养细胞，需更换新配制的完全培养基。
初次传代建议使用1:2比例进行。
T-47D细胞对激素非常敏感，需注意培养过程中对雌激素和抗雌激素的反应。

常见问题

贴壁缓慢：T-47D细胞在传代前期贴壁和展开时间较长，需耐心观察。
生长速度变化：传代初期T-47D细胞生长速度可能较慢，48小时后贴壁牢固后生长加快。
运输影响：运输过程可能导致T-47D细胞脱落或成团，需进行离心回收。
培养基变化不敏感：T-47D细胞的培养基颜色变化不明显，需通过显微镜确认细胞状态。