mda-mb-435s细胞（人黑色素瘤细胞/人乳腺癌细胞）

MDA-MB-435s细胞最初是MDA-MB-435细胞的纺锤形变异体，1976年从一名31岁患有转移性乳腺导管癌女性的胸腔积液中分离出来。

近年来研究对MDA-MB-435及其衍生的MDA-MB-435s细胞的起源提出了质疑：MDA-MB-435细胞系的基因表达更类似于黑色素瘤细胞系，而非乳腺细胞系，通过调查细胞身份发现MDA-MB-435细胞系受到M14黑色素瘤细胞的交叉污染。

MDA-MB-435s细胞系的染色体模态数为56，范围在55到62之间。MDA-MB-435s细胞系为非整倍体人类女性（XX）细胞，正常的N6、N11和N22染色体缺失，而N7、N13、N18和N21染色体为单一染色体。大多数剩余的正常染色体通常成对存在，但N2染色体为三重态。研究还鉴定出了19条标记染色体，其中大多数是由于正常染色体的结构改变而产生的。六个标记涉及N7染色体区域，三个标记被认为是N6染色体的衍生物。正常染色体和配对染色体N3、N15、N17、N20的第三拷贝分别标记在M1、M2、M15和M5标记中。

mda-mb-435s细胞特性

研究发现MDA-MB-435及其衍生的MDA-MB-435s细胞的起源，其更类似于黑色素瘤细胞系而非乳腺癌细胞。
MDA-MB-435细胞系被证实具有黑素细胞来源，并且发现其受到M14黑色素瘤细胞的污染。
MDA-MB-435s细胞在免疫抑制小鼠中不具备致瘤性。
MDA-MB-435s细胞的基因表达包括微管蛋白和肌动蛋白。
MDA-MB-435s细胞的同工酶谱包括AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；PGM1, 2；PGM3，1。
MDA-MB-435s细胞系的衍生细胞包括M4A4、M4A4 GFP、M4A4 LM3-2 GFP、M4A4 LM3-4 CL 16 GFP、NM2C5和NM2C5-GFP。

mda-mb-435s细胞参数表

细胞名称	MDA-MB-435s人黑色素瘤细胞/人乳腺癌细胞（STR鉴定正确）
细胞别称	MDA-MB-435s, MDA-MB-435 S, MDA-MB-435-S, MDAMB435S, BrCL15
细胞系衍生株	M4A4, M4A4 GFP, M4A4 LM3-2 GFP, M4A4 LM3-4 CL 16 GFP, NM2C5, NM2C5-GFP
种属来源	人
年龄性别	女，31岁
组织来源	乳腺，乳房，导管，导管癌，胸腺渗出液
生长特性	贴壁生长
细胞形态	纺锤形细胞样
细胞代数	10代以内
生物安全等级	1
支原体检测	无
培养基	90% DMEM + 10% FBS
培养条件	气相：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件	无血清冻存液，液氮储存
染色体	55~58
致瘤性	在免疫抑制小鼠中不致瘤；在半固体培养基中致瘤
基因表达情况	微管蛋白；肌动蛋白
背景介绍	MDA-MB-435S细胞是一种纺锤形的细胞，1976年由其亲本MDA-MB-435细胞中筛选得到。
细胞特性	1) 来源：乳腺导管腺癌；黑素瘤 2) 形态：纺锤形，贴壁生长 3) 染色体数目：55至60之间；正常染色体N6、N11和N22缺失，染色体N7、N13、N18和N21为单一染色体。
同工酶	AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；PGM1, 2；PGM3，1
保藏机构	ATCC; HTB-129；中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心

培养教程

mda-mb-435s细胞培养教程

一、MDA-MB-435s细胞复苏

解冻：将含有1mL MDA-MB-435s细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，解冻过程应在2分钟内完成，以防MDA-MB-435s细胞损伤。
离心：将解冻后的MDA-MB-435s细胞悬液加入到含4-6mL完全培养基的离心管中，混合均匀。在1000 RPM条件下离心3-5分钟，弃去上清液。
重悬细胞：用适量的完全培养基重悬MDA-MB-435s细胞，将MDA-MB-435s细胞悬液转移到含6-8mL完全培养基的培养瓶或培养皿中。
培养：将培养瓶置于37℃培养箱中过夜，第二天显微镜下观察MDA-MB-435s细胞生长情况和密度。

二、MDA-MB-435s细胞传代

当MDA-MB-435s细胞密度达到80%-90%时，可进行传代培养。以下是贴壁MDA-MB-435s细胞传代的详细步骤：
弃去培养上清：用不含钙、镁离子的PBS润洗MDA-MB-435s细胞1-2次。

消化细胞：

加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）。
将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2分钟，难消化的MDA-MB-435s细胞可适当延长时间。
在显微镜下观察MDA-MB-435s细胞消化情况，当大部分MDA-MB-435s细胞变圆并脱落时，立即终止消化。
终止消化：轻敲几下培养瓶后，加入3-4mL含10%FBS的完全培养基终止消化。

离心和重悬：

轻轻打匀后吸出MDA-MB-435s细胞悬液，在1000 RPM条件下离心3-5分钟，弃去上清液。
用1-2mL完全培养基重悬MDA-MB-435s细胞，将MDA-MB-435s细胞悬液按1:2的比例分到新的T25培养瓶中。
继续培养：添加6-8mL新配制的完全培养基，以维持MDA-MB-435s细胞的生长活力。后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例进行。

三、MDA-MB-435s细胞冻存

为了确保实验的连续性和稳定性，在MDA-MB-435s细胞培养的初期阶段建议进行MDA-MB-435s细胞冻存。以下是具体步骤：
细胞收集：按照传代培养的步骤消化MDA-MB-435s细胞，将消化后的MDA-MB-435s细胞收集到离心管中。
细胞计数：使用血球计数板确定MDA-MB-435s细胞浓度，推荐冻存密度为1×10^6至1×10^7个活MDA-MB-435s细胞/mL。

离心和重悬：

在1000 RPM条件下离心3-5分钟，弃去上清液。
用配制好的冻存液（90%血清，10%DMSO）重悬MDA-MB-435s细胞。
冻存管分装：将重悬后的MDA-MB-435s细胞按每管1mL的比例分装到冻存管中，并标注好名称、代数、日期等信息。
程序降温：将MDA-MB-435s细胞冻存管置于程序降温盒中，在-80℃冰箱中过夜，之后转入液氮罐中长期保存。