mda-mb-453细胞 (人乳腺癌细胞)

MDA-MB-453细胞株由R. Cailleau等人于1976年从一位48岁患有转移性乳腺癌的白人女性患者的胸水中分离出来，转移部位包括淋巴结、大脑、胸膜腔和心包腔。

MDA-MB-453细胞系为非整倍体的女性细胞，染色体模态数为90，范围在87至91之间。其染色体数目从亚倍体到接近四倍体不等。
MDA-MB-453细胞系中缺失了正常的N11、N13和N17染色体，而N2、N6和N12染色体的拷贝数明显不足，N20染色体则过度表达。
MDA-MB-453细胞系中存在大量一致的标记染色体，许多染色体具有多个拷贝。

MDA-MB-453细胞系的染色体模式包括22条重排的结构染色体，主要呈现四倍体状态，其中多倍体细胞占6%。

mda-mb-453细胞特性

mda-mb-453细胞表达成纤维细胞生长因子（FGF）和FGF受体。
mda-mb-453细胞呈混合形态，贴壁的上皮状细胞、单个悬浮活细胞和细胞簇。
mda-mb-453细胞高水平表达功能性雄激素受体（AR）。
mda-mb-453细胞在免疫抑制小鼠中不形成肿瘤，但在半固体培养基中形成菌落。
同工酶包括AK-1（1）、ES-D（1-2）、G6PD（B）、GLO-I（1）、PGM1（1）和PGM3（1）。
mda-mb-453细胞不属于三阴性乳腺癌细胞，ER和PR为阴性，HER-2为阳性。

mda-mb-453细胞参数表

细胞名称	mda-mb-453细胞 (人乳腺癌细胞)
细胞别称	MDA-MB 453; MDA MB 453; MDA-MB453; MDAMB453; MDA-453; MDA453; MD Anderson-Metastatic Breast-453
来源	乳腺腺癌；胸腔积液转移；女性；48岁
建立者	R. Cailleau 等
建立时间	1976年
细胞形态	上皮细胞样
细胞类型	肿瘤细胞
生长特性	贴壁生长
生物安全等级	1
致瘤性	免疫抑制小鼠中不致瘤；在半固体培养基中致瘤
倍增时间	38-62小时
培养基	Leibovitz's L-15 + 10% FBS + 1% P/S
培养环境	37℃；100%空气；饱和湿度
推荐换液频率	2-3次/周
传代比例	1:2至1:6
冻存条件	基础培养基 + 10% DMSO + 20% FBS，液氮保存
细胞活力	90%（Trypan Blue Exclusion 测试）
细胞纯度	94%
检测结果	不含HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
表达式标记	成纤维细胞生长因子（FGF）受体，表达
同工酶	AK-1，1；ES-D，1-2；G6PD，B；GLO-I，1；PGM1, 1；PGM3，1
细胞用途	仅供科研使用，不可用于临床诊断和治疗
细胞系描述	MDA-MB-453细胞是由R·Cailleau等在1976年从一位48岁女性肿瘤转移患者胸水中建立的细胞株，其它转移灶包括淋巴结、脑和胸水及心包腔积水；MDA-MB-453细胞过表达FGF受体。
运输条件	干冰运输（1 Vial）或活细胞运输（T-25flasks）
保藏机构	ATCC, BCRC, ECACC, JCRB, RCB

培养教程

mda-mb-453人乳腺癌细胞培养教程

细胞复苏

将含有1mL MDA-MB-453细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面低于冻存管盖部），摇晃解冻。
解冻后，立即将细胞悬液移入预先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中，混合均匀。
在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液。
加入1mL新鲜培养基，轻轻吹匀细胞。
将所有MDA-MB-453细胞悬液移入含有5mL培养基的培养瓶中，培养过夜。
第二天更换培养基，并检查细胞密度。

细胞传代

当MDA-MB-453细胞密度达80%-90%时，进行传代培养。
尽量吸干净T25瓶中的旧培养基。
加3-4ml常温PBS轻轻润洗MDA-MB-453细胞10-20秒，然后吸走PBS。
在T25瓶中加1ml左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使胰酶均匀覆盖细胞层。
将培养瓶放入37度培养箱中消化。
当MDA-MB-453细胞间隙变大但未完全脱落时，加入2-3ml完全培养基终止胰酶消化。
混匀细胞，900rpm离心3-5分钟，弃去上清。
加入新的完全培养基轻轻重悬细胞，将细胞悬液均匀分到新的培养瓶中。
补足完全培养基，将培养瓶放回培养箱继续培养。

细胞冻存

消化并离心后获得MDA-MB-453细胞沉淀，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞。
将细胞悬液迅速移入已标记好的冻存管中。
将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存。
若没有程序冻存盒，可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10分钟，再在-20度静置2小时后转入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存。

MDA-MB-453细胞培养注意事项

MDA-MB-453细胞使用L15培养基，不需要CO₂平衡。
L-15培养基采用磷酸盐和游离氨基酸缓冲，适用于非CO₂环境中的细胞生长。
若没有无空气培养箱，可以使用不透气培养瓶（密封瓶盖）培养MDA-MB-453细胞，并将瓶盖拧紧，每次操作时开盖短时间接触到的二氧化碳不会影响正常培养。
MDA-MB-453细胞也可以使用HD培养基在5%CO₂浓度培养箱中培养，此条件下细胞形态和倍增时间几乎没有影响。

MDA-MB-453细胞培养数据

形态：上皮样，圆形，单层松散附着。
培养基：80-90%莱博维茨L-15培养基+10-20%h.i.FBS。
亚培养：以2-4×10⁶个MDA-MB-453细胞/80 cm²的速度接种；使用胰蛋白酶/EDTA以1:2至1:6的比例分开融合培养；可以通过轻敲烧瓶来部分分离细胞；细胞可能需要几天才能再次粘附。
培养：37°C，无CO₂气体交换（无过滤盖，烧瓶盖关闭）。
加倍时间：约50-60小时。
收获：约25-35 x 10⁶个MDA-MB-453细胞/80 cm²。
储存：用85%培养基、10%FBS、5%DMSO冷冻。
支原体：用环丙沙星消除最初的污染，然后在DAPI、微生物培养、RNA杂交和PCR检测中呈阴性。