HeLa-S3细胞系（人宫颈癌细胞系）

HeLa S3细胞是从HeLa细胞系克隆衍生出的人宫颈癌细胞。helas3细胞克隆在哺乳动物细胞的克隆分析中对研究染色体变异、细胞营养需求和斑块形成能力非常有用。helas3细胞是转染实验的理想宿主。helas3细胞含有人乳头瘤病毒18型（HPV-18）序列。HeLa S3 细胞系于1955年由 Puck TT、Marcus PI 和 Cieciura SJ 从宫颈癌组织中建立。

HeLa S3 细胞中均存在中等大小的稳心标记物，其标记包括一个 M1 拷贝，一个 M2 拷贝，两个 M3 拷贝和一个 M4 拷贝。helas3细胞系存在一定的细胞遗传不稳定性。

HeLa-S3细胞系特性特征

病毒序列：含有人乳头瘤病毒18型（HPV-18）序列.
角蛋白表达：通过免疫过氧化物酶染色，细胞角蛋白呈阳性.
同工酶表达：G6PD 和 A
转染宿主：helas3细胞适合作为转染宿主
研究应用：用于染色体变异研究、细胞营养研究、斑块形成能力相关的哺乳动物细胞群克隆分析.
helas3细胞对以下病毒具有易感性：水疱性口炎病毒（格拉斯哥株和奥赛株）、脑心肌炎病毒、人腺病毒5型

HeLa-S3细胞系参数表

细胞名称	HeLa-S3细胞系（人宫颈癌细胞系）
细胞别称	HeLas3; HeLa-S3; HELA-S3; HeLa/S3; HeLa.S3; HeLaS3; HeLaS-3; HeLaS3; S3-HeLa; S3HeLa
来源	人宫颈癌
患者信息	人 / 女 / 31岁
组织	子宫颈部
疾病	腺癌
建立信息	1955年，Puck TT, Marcus PI 和 Cieciura SJ
形态	上皮细胞样
生长方式	贴壁生长，可适应悬浮生长
病毒序列	含有 HPV-18 序列
角蛋白	阳性
倍增时间	约30-40小时
培养基/血清	F12K+10% FBS+1% P/S
培养环境	37°C，5% CO2，70-80%湿度
传代比例	1:2 至 1:5
悬浮培养条件	37℃，5% CO2，110rpm振荡培养
悬浮培养基	EX-Cell®293 或 VirusPro®CD HeLa + EX-Cell®293 1:1组合
悬浮培养初始密度	约 5×10^5 cells/ml
悬浮培养传代密度	约 4×10^6 cells/ml
冻存条件	90% 血清，10% DMSO；-80°C（24小时后转入液氮）
冻存细胞密度	5x10^6~1x10^7/mL
同工酶	G6PD，A
病毒易感性	水疱性口炎病毒（格拉斯哥株和奥赛株）、脑心肌炎病毒、人腺病毒5型
应用领域	染色体变异研究、细胞营养研究、斑块形成能力研究、转染宿主
病毒扩增	可用于痘苗病毒扩增
基因组特征	不含有野生型腺病毒的部分基因组（如E1区）

培养教程

HeLa-S3人宫颈癌细胞系培养教程

HeLa S3 细胞复苏

将冻存的 HeLa S3 细胞从液氮中取出，在37°C水浴中快速解冻。
将 HeLa S3 细胞悬液转移到含有预热培养基的T25培养瓶中。
将培养瓶置于37°C、5% CO2的培养箱中静置培养2-4小时，让 HeLa S3 细胞贴壁。

HeLa S3 细胞常规培养

培养基：DMEM或F12K，添加5-10%胎牛血清和1%双抗。
培养条件：37°C，5% CO2，70-80%湿度。
每2-3天更换 HeLa S3 细胞的培养基。
定期观察 HeLa S3 细胞状态，确保细胞健康和适当的密度。

HeLa S3 细胞传代

当 HeLa S3 细胞密度达到80-100%时进行传代。
用PBS清洗 HeLa S3 细胞，然后加入胰酶消化细胞。
收集消化后的 HeLa S3 细胞，900rpm离心5分钟。
按1:2至1:5的比例传代到新的培养瓶中，继续培养 HeLa S3 细胞。

HeLa S3 细胞悬浮培养驯化（如需要）

将贴壁培养的 HeLa S3 细胞消化后，用EX-Cell®293培养基重悬。
转入125ml摇瓶中，初始密度约5×10^5 HeLa S3 cells/ml。
培养条件：37°C，5% CO2，110rpm振荡培养。
每3天传代一次，维持 HeLa S3 细胞密度在4×10^6 cells/ml左右。

HeLa S3 细胞悬浮培养扩大

培养基：VirusPro®CD HeLa 和 EX-Cell®293 1:1组合。
将 HeLa S3 细胞悬浮培养扩大至50L一次性生物反应器。
接种密度约为1.0×10^6 HeLa S3 cells/ml。

HeLa S3 细胞病毒扩增（如适用）

最佳接毒密度：3-4×10^6 HeLa S3 cells/ml。
最佳MOI：0.02-0.1 pfu/HeLa S3 cell。

HeLa S3 细胞冻存

收集对数生长期的 HeLa S3 细胞。
使用90%血清和10% DMSO的冻存液。
HeLa S3 细胞密度调整至5×10^6至1×10^7 HeLa S3 cells/ml。
将 HeLa S3 细胞悬液分装到冻存管中，每管1ml。
放入-80°C冰箱24小时后转入液氮长期保存 HeLa S3 细胞。

HeLa S3 细胞培养注意事项

定期检查 HeLa S3 细胞形态和生长状况：
使用倒置显微镜观察 HeLa S3 细胞形态和密度，确保健康状态。
健康的 HeLa S3 细胞应呈上皮样，贴壁良好，形态均一。
避免 HeLa S3 细胞过度生长或密度过高：
及时传代 HeLa S3 细胞，保持细胞在适当的密度范围内。
传代比例一般为1:2至1:5。
无菌操作，预防 HeLa S3 细胞污染：
确保所有操作在无菌环境下进行。
定期检查培养基和 HeLa S3 细胞状态，及时发现和处理污染。
HeLa S3 细胞鉴定：
定期进行 HeLa S3 细胞鉴定，确保细胞特性稳定。
HeLa S3 细胞应显示角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性，含有 HPV-18 序列。

HeLa S3 细胞常见问题

污染问题：定期检查 HeLa S3 细胞培养基和细胞状态，及时发现和处理污染。
细胞过度生长：HeLa S3 细胞密度过高会影响细胞健康，需及时传代。
培养基更换：HeLa S3 细胞培养基营养耗尽时需及时更换，通常每2-3天更换一次。
细胞贴壁不良：复苏后 HeLa S3 细胞可能贴壁不良，需静置培养2-4小时以稳定细胞状态。
悬浮培养驯化：从贴壁生长转换为悬浮生长时，需逐步适应，避免 HeLa S3 细胞应激。