RWPE-2细胞系来源于54岁白人男性的前列腺正常上皮细胞，最初是通过对RWPE-1细胞系的转化而获得。RWPE-1细胞系是从前列腺外周区的正常上皮细胞中提取，并通过转染携带人乳头瘤病毒18（HPV-18）基因组的质粒建立的。这一转染步骤赋予了细胞不死化特性，使其能够在体外长期存活。RWPE-2细胞在第14代，大多数细胞在近二倍体范围内（48-54），主要群体为51，XY。

RWPE2细胞特性特征

• RWPE2细胞表达细胞角蛋白8和细胞角蛋白18，这些是上皮细胞的标志性蛋白。

• RWPE2细胞雄激素受体（AR）表达上调，尤其是在暴露于雄激素后。

• 抗原表达：激肽释放酶3（KLK3），即前列腺特异性抗原（PSA），在雄激素刺激下表达。

• 致瘤性：RWPE-2细胞在软琼脂中能够形成小菌落，并且在注射到裸鼠体内时能形成肿瘤，显示出其致瘤能力。

• 衍生细胞系：RWPE-1细胞还通过暴露于N-甲基-N-硝基脲（MNU）衍生出了多个用于模拟前列腺癌症不同进展阶段的细胞系，包括WPE1-NA22、WPE1-NB14、WPE1-NB11和WPE1-NB26。

RWPE2细胞参数表

RWPE2人前列腺正常细胞培养教程

细胞复苏

• 将37℃水浴锅预热。

• 准备好适合RWPE2细胞生长的K-SFM培养基（含0.05 mg/ml BPE和5 ng/ml EGF）。

• 从液氮中取出冻存的RWPE2细胞冻存管，迅速在37℃水浴中摇晃解冻，时间约为1-2分钟，直到RWPE2细胞完全融化。

• 加入4 mL培养基，轻轻混合均匀，以确保RWPE2细胞的充分悬浮。

• 在1000 rpm条件下离心5分钟，弃去上清液。

• 加入1-2 mL新鲜培养基后轻轻吹匀RWPE2细胞。

• 将细胞悬液转移到适量的培养瓶中（如T25瓶），加入适量的培养基（约8 mL），置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养RWPE2细胞过夜。

• 第三天更换培养基并检查RWPE2细胞的密度。

RWPE2细胞传代

• 当RWPE2细胞密度达到80%-90%时进行传代。

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗RWPE2细胞1-2次。

• 加入1 mL消化液（0.25%胰酶和0.02% EDTA），确保消化液覆盖所有RWPE2细胞。

• 弃去消化液，将培养瓶放入37℃培养箱中消化1-3分钟，根据RWPE2细胞的消化情况观察。

• 当大部分RWPE2细胞变圆并脱落时，迅速轻敲几下培养瓶，并加入6-8 mL新鲜培养基以终止消化。

• 将RWPE2细胞悬液转移到无菌离心管中，1000 rpm离心4分钟，弃去上清液。

• 补加1-2 mL新鲜培养基后轻轻吹匀RWPE2细胞。

• 将RWPE2细胞悬液按1:2比例分配到新的含有8 mL培养基的培养皿或瓶中。

RWPE2细胞冻存

• 收集生长状态良好的RWPE2细胞及其培养液，转移至无菌离心管中，1000 rpm离心4分钟，弃去上清液。

• 用PBS清洗一次后，再次弃去PBS。加入1 mL血清重悬RWPE2细胞，并进行细胞计数。

• 根据RWPE2细胞数量加入无血清冻存液，使最终细胞浓度达到5×10^6至1×10^7 cells/mL，轻轻混匀RWPE2细胞悬液。

• 每个冻存管中加入1 mL RWPE2细胞悬液，并做好标识。

• 将RWPE2细胞冻存管放入-80℃冰箱冷冻24小时后，再转入液氮罐储存。