ECV304细胞系来源于人脐静脉内皮细胞（HUVEC）自发转化而来，通过深入的基因组分析，发现ECV304细胞系与T24膀胱癌细胞系在基因上高度一致，证实被膀胱癌细胞污染。ECV304细胞被重新归类为膀胱癌细胞系，而不是内皮细胞系。ECV304细胞最早源自一名82岁男性患者的膀胱癌组织，广泛用于膀胱癌的相关研究中。

ECV304细胞（人膀胱癌细胞）参数表

ECV304人膀胱癌细胞培养教程

细胞复苏步骤

• 细胞解冻： 从液氮罐中取出冻存的ECV304细胞管，并立即置于37℃的水浴中迅速解冻，直至细胞悬液完全融化。

• 细胞转移： 使用无菌移液管，将融化后的细胞悬液缓慢移入含有10 ml预热培养基的15 ml离心管中。

• 细胞离心： 以200×g的速度离心5分钟，弃去上清液。

• 细胞重悬： 使用5 ml新鲜培养基重悬细胞，然后将细胞悬液接种到T25培养瓶中，并加入足够的培养基，使总体积达到10 ml。

• 细胞培养： 将培养瓶置于37℃、5% CO₂的培养箱中进行培养。

细胞传代步骤

• 细胞汇合状态： 当细胞贴壁生长至80-90%汇合时，弃去旧的培养基，用PBS溶液冲洗细胞1-2次。

• 消化细胞： 加入2-3 ml 0.25%胰酶-EDTA溶液，并在37℃孵育2-3分钟，直至细胞脱落。

• 终止消化： 加入5 ml培养基终止消化反应，并轻轻吹打以使细胞悬浮均匀。

• 细胞离心： 以200×g的速度离心5分钟，弃去上清液。

• 细胞重悬与传代： 用5 ml新鲜培养基重悬细胞，并按1:3或1:4的比例接种到新的培养瓶中。根据细胞密度，加入适量培养基。

• 细胞培养： 将培养瓶置于37℃、5% CO₂的培养箱中继续培养。

细胞培养周期与注意事项

• 培养周期： ECV304细胞的培养周期通常为2-3天，具体周期取决于细胞的生长状态和密度。在细胞生长至80-90%汇合时，应进行传代。复苏后的细胞通常需要约24小时的适应期，之后进入正常的生长阶段。

• 传代频率： 细胞状态应每2-3天检查一次，确保在达到适宜的汇合度时及时传代。

• 生长条件： ECV304细胞在适宜的培养条件下生长迅速，形态稳定，表现出良好的细胞分裂与增殖速度。

• 培养基更换： 培养基应每2-3天更换一次，以保证细胞的生长环境清洁。

• 无菌操作： 传代和培养过程需严格遵循无菌操作规范，避免细胞污染。

• 细胞冻存： 使用含10% DMSO的冻存液进行细胞冻存，以确保细胞的长期保存。