J82细胞（人膀胱移行细胞癌）

J82细胞系是一种人类膀胱移行细胞癌细胞系，来源于一位58岁的白种男性患者。J82细胞具有上皮细胞样的形态特征，贴壁生长。在电镜下观察，J82细胞显示出丰富的粗面内质网和突出的微丝结构，但未发现桥粒的存在。

J82细胞的染色体组成非整倍体，染色体计数广泛分布在三倍体范围内，具有多样化的染色体异常，包括标记性染色体的存在。这些标记染色体包括但不限于20q+、11q+、8p+、del（1）（q31）、5p+（HSR），其中20q与C.O’Toole等人研究中的标记染色体M1相同，其余部分与原始标记染色体的相关性较低。

J82细胞特性

J82细胞在裸鼠中具有致瘤性。
J82细胞表达多种人类白细胞抗原（HLA），具体包括：HLA A2、HLA Aw32、HLA B5、HLA B12、HLA Cw5
血型：J82细胞的血型为A型。
同工酶：AK-1，1；ES-D，1；G6PD，B；GLO-I，2；Me-2，1-2；PGM1，1；PGM3，2。
J82细胞细胞内部结构：电镜检查无桥粒、具有大量粗面内质网和突出的微丝。
J82细胞可以表达ras基因。Ras基因是一种重要的原癌基因，其异常表达与多种癌症的发生发展有关。

J82细胞参数表

细胞名称	J82细胞（人膀胱移行细胞癌）
中文名称	人膀胱移行细胞癌
细胞别称	J-82; J 82; J82COT; J82 COT
细胞形态	上皮细胞样
生长特性	贴壁细胞
种属	人
组织来源	器官：膀胱；疾病：移行细胞癌
细胞类型	肿瘤细胞
肿瘤类型	膀胱癌细胞
供体年龄/性别	58岁/男性
培养基	MEM（含NEAA）+10% FBS+1% P/S
培养条件	37°C，5% CO2，95%空气
推荐传代比例	1:2-1:4
推荐换液频率	2-3次/周
消化时间	2-3分钟
冻存条件	55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO，液氮保存
生物安全等级	BSL-1
致瘤性	在裸鼠中有致瘤性
抗原表达	HLA A2, Aw32, B5, B12, Cw5
血型	A型
保藏机构	ATCC; HTB-1
细胞特征	胞内无桥粒，有大量粗面内质网及突出绒毛，可表达ras基因

培养教程

J82细胞人膀胱移行细胞癌培养教程

J82细胞传代步骤

吸出J82细胞原培养液。
加入约2mL PBS，轻轻晃动培养瓶润洗J82细胞，吸出PBS丢弃。
加入约1mL 0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使之浸润所有J82细胞。
将培养瓶放入培养箱消化，显微镜下观察，当J82细胞变圆且出现间隙时终止消化。
加入3mL含血清的培养基终止消化，吹打J82细胞使其脱壁并呈单细胞悬液。
收集J82细胞悬液，离心（1200rpm/min，3分钟），吸出上清丢弃。
加入新鲜培养基，吹打混匀J82细胞，按比例接种到新培养瓶，补足培养基。
拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

J82细胞复苏

从液氮或-80°C冰箱中取出冻存J82细胞，在37°C水浴中快速解冻（约1分钟）。
将解冻的J82细胞悬液转移到含5ml预热完全培养基的15ml离心管中。
1000rpm离心5分钟。
弃上清，用2ml完全培养基重悬J82细胞。
将J82细胞悬液转移到T25培养瓶中，补充适量培养基。
放入37°C，5% CO2培养箱中培养。
24小时后观察J82细胞贴壁情况，更换新鲜培养基。

常见问题与解决方法

细胞贴壁问题：
运输过程中可能发生J82细胞脱落，静置后可恢复贴壁。若J82细胞脱落或抱团，可将培养瓶置于37°C培养箱中2-3小时后重新接种。
培养基问题：
运输用的培养基不宜再次用来培养J82细胞，应按照说明书新配置完全培养基。
细胞污染：
收到J82细胞后用75%酒精对培养瓶表面消毒，定期检查J82细胞是否有污染迹象。
细胞生长状态不佳：
可能由于培养条件不适或传代次数过多，确保使用正确的培养基和培养条件，定期观察J82细胞形态和生长速率。
细胞密度问题：
过高或过低的细胞密度都会影响J82细胞生长，J82细胞生长到80%-90%汇合度时进行传代，推荐传代比例为1:2-1:4。
细胞鉴定问题：
长期培养可能导致J82细胞特性变化，定期进行STR鉴定，确保J82细胞的遗传稳定性。
冻存和复苏问题：
不当的冻存和复苏操作可能导致J82细胞活力下降，严格按照冻存和复苏流程操作，使用正确的冻存液（55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO）。
细胞形态变化：
长期培养可能导致J82细胞形态变化，定期观察J82细胞形态，如有明显变化，考虑使用低传代次数的J82细胞。