NCI-H2452人间皮瘤细胞培养教程

NCI-H2452细胞复苏

• 解冻: 从液氮中取出冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻。

• 转移: 将NCI-H2452细胞悬液转移到含有预热完全培养基的离心管中。

• 离心: 以900rpm离心3-5分钟。

• 重悬: 弃去上清，用完全培养基重悬NCI-H2452细胞。

• 培养: 将NCI-H2452细胞悬液转移到培养瓶中，置于培养箱中培养。

日常培养

• 换液周期: 每2-3天更换一次培养基。

• 培养基体积: T25瓶使用10-12ml，10cm培养皿使用12-15ml。

• 观察: 定期观察NCI-H2452细胞的生长状态，注意可能出现的黑点。

NCI-H2452细胞传代

• 达到密度: 当NCI-H2452细胞密度达到80-90%时进行传代。

• 洗涤: 弃去旧培养基，用PBS轻轻冲洗NCI-H2452细胞1-2次。

• 消化: 加入适量胰酶，37℃消化（NCI-H2452细胞贴壁较弱，需严格控制消化时间）。

• 观察: 每隔2-3分钟观察一次NCI-H2452细胞状态，当细胞间隙变大、细胞趋于圆形但未完全脱落时，立即终止消化。

• 终止消化: 加入等体积完全培养基终止消化。

• 离心: 以900rpm离心3-5分钟。

• 重悬: 弃去上清，用新鲜完全培养基重悬NCI-H2452细胞。

• 接种: 按1:2到1:4的比例将NCI-H2452细胞接种到新的培养瓶中。

注意事项

• 操作: 操作时轻柔吹打NCI-H2452细胞，避免产生过多气泡。

• 观察: 定期观察NCI-H2452细胞形态和生长状态，保持无菌操作以预防污染。

• 消化时间: 严格控制NCI-H2452细胞的消化时间，避免过度消化。

NCI-H2452细胞冻存

• 冻存液: 使用92% FBS + 8% DMSO或92% 完全培养基 + 8% DMSO作为冻存液。

• 细胞密度: 调整至200-300万/ml。

• 分装: 每管分装1ml NCI-H2452细胞悬液。

• 程序降温:4℃静置5-10分钟；-20℃静置2小时；-80℃过夜；转入液氮长期保存

培养中的常见问题

• 黑点: 培养时NCI-H2452细胞可能出现黑点较多的情况。

• 贴壁较弱: NCI-H2452细胞贴壁较弱，容易脱落。