NCI-H295R细胞（人肾上腺皮质腺癌细胞）

NCI-H295R人肾上腺皮质腺癌细胞是于1980年从一位48岁女性肾上腺皮质癌患者的肾上腺中分离，原始细胞系命名为NCI-H295。NCI-H295R细胞系保留了生成肾上腺类固醇激素的能力，并且对血管紧张素II和钾离子具有反应性。

NCI-H295R细胞改自多能性肾上腺皮质癌细胞系NCI-H295，通过改变培养条件，使其群体倍增时间从5天缩短到2天，从而获得更高的生长速率。最初的NCI-H295细胞在悬浮培养中生长，而改良后的NCI-H295R细胞则适应了单层贴壁生长。同时，还获得了三种改良细胞株：H295R-S1、H295R-S2和H295R-S3。

NCI-H295R细胞具有以下特性和特征：

分子特征：能够产生多种类固醇激素，包括醛固酮、皮质醇和C19类固醇；对血管紧张素II和钾离子具有反应性。
表达特征：表达多种类固醇合成相关的基因，包括醛固酮、皮质醇和C19类固醇的合成基因；保留了产生雄激素的能力。
NCI-H295R细胞形态为上皮细胞样；生长特性为贴壁生长，呈单层附着培养。
在激素分泌和细胞特征上与原代培养的人肾上腺皮质细胞最接近

NCI-H295R细胞参数表

细胞名称	NCI-H295R细胞（人肾上腺皮质腺癌细胞）
细胞别称	NCI-H295R (别称: H295R, NCIH295R, H-295R, H295R-S1, h295r)
来源	人(Homo sapiens)肾上腺皮质腺癌细胞
患者信息	48岁，女性，黑人
建系信息	1980年建系，原代细胞系为NCI-H295
生物安全等级	BSL-1
细胞形态	上皮细胞样，大小约15-20μm，细胞核圆形或椭圆形
生长特性	贴壁生长，单层
培养基	DMEM/F12 (1:1) + 2.5% Nu-Serum + 1% ITS+ Premix
培养环境	37°C, 5% CO2, 饱和湿度
传代信息	比例1:2-1:4, 换液2-3次/周, 70-80%汇合度时传代
生长特性	群体倍增时间约2天，贴壁时间约24小时
冻存液	55%基础培养基 + 40%FBS + 5%DMSO
冻存参数	温度-196°C, 密度1-2×10^6 cells/mL, 复苏存活率≥85%
激素分泌	醛固酮、皮质醇、C19类固醇（DHEA、雄烯二酮）
特殊反应性	对血管紧张素II和钾离子有反应
酶活性	CYP11B1, CYP11B2, CYP17, CYP21A2
受体表达	ACTH受体, 血管紧张素II受体
基因表达	StAR, CYP11A1, HSD3B2, CYP17A1, CYP21A2, CYP11B1, CYP11B2
蛋白表达	P450scc, 3β-HSD, P450c17, P450c21, P450c11
遗传学特征	染色体数62-65 (近三倍体), TP53突变
研究用途	肾上腺皮质功能研究、激素分泌研究、环境内分泌干扰物筛选
检测指标	基因表达、酶活性、激素水平
其他应用	肾上腺皮质癌治疗药物开发，环境毒素对肾上腺皮质功能的影响研究
细胞检测	活力≥95%, 无菌(细菌、真菌、支原体均阴性)
鉴定方法	人源鉴定，STR分析，PCR法检测支原体
保藏机构及编号	ATCC (CRL-2128), DSMZ (ACC 741), JCRB (JCRB1020)
相关细胞系	H295R-S1, H295R-S2, H295R-S3
细胞特性	培养代次建议20代以内，贴壁效率>90%
肿瘤相关特性	迁移能力低，侵袭能力中等，在免疫缺陷小鼠中可形成肿瘤
转染和药物反应	转染效率中等(40-60%)，对米托坦(Mitotane)敏感
细胞周期分布	G0/G1: 60-70%, S: 15-20%, G2/M: 10-15%
其他特征	基础凋亡率<5%，高糖酵解率

培养教程

NCI-H295R人肾上腺皮质腺癌细胞培养教程

NCI-H295R细胞复苏

从液氮中取出NCI-H295R细胞，迅速置于37°C水浴中快速解冻。
将NCI-H295R细胞悬液转移到含15mL预热培养基的50mL离心管中。
以1000rpm离心5分钟，弃去上清。
用新鲜培养基重悬NCI-H295R细胞，转移到培养瓶中。
将培养瓶置于37°C，5% CO2培养箱中培养。

NCI-H295R细胞传代

当NCI-H295R细胞汇合度达到70-80%时进行传代。
推荐传代比例：1:2 - 1:4。
用PBS洗涤NCI-H295R细胞1-2次。
加入适量胰酶-EDTA消化液，37°C孵育2-3分钟。
加入等体积含血清的培养基终止消化。
以1000rpm离心5分钟，弃去上清。
用新鲜培养基重悬NCI-H295R细胞，按所需比例接种到新的培养瓶中。

NCI-H295R细胞冻存

冻存液配方： 55%基础培养基 + 40%FBS + 5%DMSO。
细胞密度： 1-2 × 10^6 NCI-H295R细胞/mL。
将NCI-H295R细胞悬液分装到冻存管中，置于-80°C冰箱中缓慢降温。
24小时后转移到液氮中长期保存。

注意事项

细胞形态： NCI-H295R细胞为贴壁生长，呈上皮细胞样形态。
反应性： NCI-H295R细胞对血管紧张素II和钾离子有反应，保留了产生雄激素的能力。
生长速率： NCI-H295R细胞群体倍增时间约为2天。
无菌操作： 使用无菌技术操作NCI-H295R细胞，避免污染。
细胞观察： 定期观察NCI-H295R细胞形态和生长状况，及时处理。

培养基组成对NCI-H295R细胞生长速度的影响

通过改变NCI-H295细胞的培养条件，改良后的NCI-H295R细胞的群体倍增时间从原来的5天减少到2天。推荐的培养基组成如下：
DMEM/F12 (1:1)基础培养基
2.5% Nu-Serum 或 10% 优质胎牛血清
1% ITS+ Premix (含有：Insulin 6.25μg/mL, Transferrin 6.25μg/mL, Selenium 6.25ng/mL)
5.35μg/mL Linoleic Acid（可选）
1% 双抗（青霉素/链霉素）
这种优化的培养基组成有助于促进NCI-H295R细胞生长和维持其特性。

NCI-H295R细胞在不同培养条件下对激素的反应

NCI-H295R细胞保留了产生雄激素的能力，并对血管紧张素II和钾离子有反应。这些特性使其成为研究肾上腺皮质功能和激素分泌的重要工具。不同的培养条件可能会影响NCI-H295R细胞对这些刺激的反应程度，需要通过实验进一步验证。

NCI-H295R细胞培养过程中的安全注意事项

生物安全等级： NCI-H295R细胞的生物安全等级为BSL-1，风险较低，但仍需遵循实验室安全规程。
无菌操作： 必须严格遵守无菌技术，防止NCI-H295R细胞污染。
细胞来源： NCI-H295R细胞来源于人类肿瘤组织，处理时需小心，避免直接接触。
化学品安全： 培养过程中使用的某些试剂（如DMSO）可能具有毒性，应按安全规程处理。
废弃物处理： 所有与NCI-H295R细胞接触过的材料应按生物废弃物处理规程处理。
用途限制： NCI-H295R细胞仅限于科学研究使用，不可用于动物或人类疾病的治疗。