HAEC-SV40细胞系是一种经SV40大T抗原基因转染的人类主动脉内皮细胞永生化细胞系。最初原代细胞来自于人类主动脉内皮，通过慢病毒转染技术引入SV40大T抗原基因，从而获得无限增殖的能力。HAEC-SV40细胞系因其稳定的增殖性和内皮细胞的特征，为血管生物学、药物筛选及疾病模型研究提供了重要的实验工具。HAEC-SV40细胞可以在适宜的条件下稳定传代20代以上，适合长时间的实验。

HAEC细胞特性特征

• HAEC细胞经过SV40大T抗原转染后，增殖能力显著增强，能够在体外长期培养而不出现衰老现象

• HAEC细胞凋亡率较低，显示出更强的存活能力

• HAEC细胞不具备恶性转化的特性，适合用于基础研究和安全性评估

• 在1μM血管紧张素II存在下会收缩

• SV40大T抗原阳性

• 基因表达与原代细胞相比基本不发生变化

• 通过免疫染色和qRT-PCR验证SV40大T抗原在永生化细胞中的表达

• HAEC-SV40细胞合适条件下至少可以稳定传代20代以上

• HAEC-SV40细胞生长迅速，可用于提取大量蛋白质进行生化分析、成本低廉，容易培养

HAEC细胞SV40永生化参数表

HAEC人主动脉内皮细胞SV40永生化培养教程

培养步骤

• 预热培养基、胰酶、PBS、离心管、培养瓶及无菌枪头至室温。

• 使用移液管吸弃HAEC细胞培养瓶中的原培养基。

• 加入3-5 mL常温PBS，轻轻润洗HAEC细胞10-20秒，随后吸走PBS。

• 加入约1 mL胰酶，轻轻晃动培养瓶以确保胰酶均匀覆盖HAEC细胞层。

• 将培养瓶放入37℃培养箱中消化，直至细胞间隙增大部分脱落。

• 当HAEC细胞间隙明显增大时，加入2-3 mL完全培养基以终止消化过程。

• 混匀细胞悬液后，进行900 rpm离心3-5分钟，弃去上清液。

• 加入新鲜的完全培养基，轻轻重悬HAEC细胞，并均匀分配到新的培养瓶中。

• 补充完全培养基后，将HAEC细胞培养瓶放回培养箱中培养。

注意事项

• 消化敏感性：HAEC细胞对消化过程极为敏感。消化时间和操作力度需严格控制，避免过度吹打以减少气泡产生。

• 细胞贴壁性：HAEC细胞的贴壁能力较弱，温度变化或运输可能导致细胞回缩。操作后需及时放回培养箱恢复。

• 培养基要求：必须使用专用的内皮细胞培养基，确保HAEC细胞健康和正常增殖。

冻存细胞步骤

• 消化并离心获得HAEC细胞沉淀后，加入含40% FBS和5% DMSO的冻存液，轻轻重悬细胞。

• 将细胞悬液迅速转移至标记好的冻存管中。

• 将冻存管放入程序冻存盒中，置于-80℃冰箱中过夜，然后转移至液氮中保存。

复苏细胞步骤

• 从液氮中取出冻存管，立即放入37℃水浴中快速复苏。

• 复苏后，将HAEC细胞悬液迅速转移至含有完全培养基的离心管中，900 rpm离心3-5分钟，弃去上清液。

• 用新鲜完全培养基重悬HAEC细胞，转移至培养瓶中，并将其放回培养箱中继续培养。