永生化人淋巴内皮细胞（HLEC-SV40T）是基于人淋巴结来源的原代淋巴管内皮细胞（LECs）构建而成。通过导入SV40大T抗原（SV40T）基因，使其突破原代细胞通常只能传代5–10代的限制，从而获得持续分裂和长期稳定培养的能力。人淋巴内皮细胞系不仅解决了原代淋巴内皮细胞增殖有限的问题，还在形态学上保持了上皮样特征，细胞多呈梭形或多角形，贴壁生长，显示出典型的内皮细胞特性。

在研究应用中，HLEC-SV40T细胞为淋巴管生成机制、淋巴系统疾病、炎症反应及肿瘤转移等领域提供了可靠的体外模型。同时，人淋巴管内皮细胞永生化也可用于药物作用验证、分子信号通路研究以及免疫学相关机制探讨，为探索淋巴系统的生物学功能与病理过程提供了重要工具。

人淋巴管内皮细胞永生化特性特征

• 表达SV40大T抗原（SV40 T antigen），是细胞永生化的关键因子，能抑制细胞周期调控相关肿瘤抑制基因，促进细胞持续增殖.

• 维持淋巴内皮细胞的特征性分子标志物表达，常见内皮细胞标志如LYVE-1、Podoplanin等（此为淋巴管内皮细胞特异标志，虽具体HLEC-SV40T数据缺乏，但原代淋巴内皮细胞中普遍表达）.

• 细胞呈贴壁生长，具有上皮样形态；

• 稳定表达SV40大T抗原，保障细胞不进入衰老期；

• 保留淋巴内皮细胞的相关功能性蛋白表达，有利于研究淋巴系统相关生理及病理过程.

• 可能具有淋巴内皮特征的基因表达谱，包括CCBE1、PROX1、VEGFR-3等淋巴内皮相关基因（此类基因通常在淋巴内皮细胞中高度表达，对淋巴管生成及功能维持至关重要）;

HLEC-SV40T细胞参数表

人淋巴管内皮细胞永生化培养教程

细胞复苏

• 从液氮罐中取出HLEC-SV40T细胞冻存管，立即置于37℃水浴中，轻轻摇动，1–2分钟内使细胞快速解冻。

• 将细胞悬液转入离心管，补加4–6 ml预热完全培养基（推荐使用DMEM或内皮细胞专用培养基，含10% FBS和必要生长因子），轻轻混匀。

• 1000 rpm离心3–5分钟，弃去上清液，去除DMSO。

• 重悬HLEC-SV40T细胞于新鲜培养基中，转移至T25培养瓶，加入6–8 ml培养液。

• 置于37℃、5% CO₂培养箱中过夜。

• 次日更换培养基，去除死细胞和杂质，保证HLEC-SV40T细胞的生长环境清洁。

细胞传代

• 当HLEC-SV40T细胞贴壁生长密度达80%–90%时进行传代。

• 弃去培养液，用无钙镁PBS洗涤1–2次。

• 加入0.25%胰酶–0.53 mM EDTA溶液（1–2 ml/T25瓶），37℃消化1–2分钟，显微镜下观察大部分细胞变圆、开始脱落时立即终止。

• 加入含10% FBS的完全培养基（约3 ml）终止消化，轻轻吹打使细胞均匀悬浮。

• 将细胞悬液转移至离心管，1000 rpm离心3–5分钟。

• 弃去上清，重悬细胞于新鲜培养基中。

• 按1:2至1:5比例将HLEC-SV40T细胞分瓶传代。

• 在37℃、5% CO₂条件下继续培养，并每2–3天更换一次培养液

细胞冻存

• 选择处于对数生长期的HLEC-SV40T细胞，经胰酶消化后收集并计数。

• 调整细胞浓度至1×10⁶–1×10⁷ 个/ml。

• 配制冻存液（92%完全培养基+8% DMSO，或92% FBS+8% DMSO）。

• 将HLEC-SV40T细胞与冻存液轻柔混匀，分装至冻存管中，每管1 ml。

• 将冻存管置于程序降温盒（如Mr. Frosty）中，以–1℃/分钟速度逐步降至–80℃，过夜保存。

• 次日转移至液氮罐中长期保存。

• 复苏时按照上述复苏步骤操作。

注意事项

• HLEC-SV40T细胞推荐使用DMEM或内皮细胞专用培养基，需补充10% FBS和适宜生长因子；

• 保持培养条件为37℃、5% CO₂；

• 全程必须严格无菌操作，避免细菌、真菌及支原体污染；

• 处于对数生长期时冻存效果最佳；

• 复苏后的HLEC-SV40T细胞需及时换液，保证状态恢复