TOLEDO细胞（人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞）

Toledo人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞系（Toledo DLBCL）是一种广泛应用于非霍奇金淋巴瘤研究的重要细胞系。TOLEDO细胞于1990年从一名患有弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）的成年女性患者的外周血中分离，患者在经历了高剂量化疗和骨髓移植后，发展为脑部淋巴瘤。尽管Toledo细胞的形态特征类似于伯基特淋巴瘤细胞，但TOLEDO细胞缺乏伯基特淋巴瘤特有的染色体易位，并显示出多种染色体畸变。TOLEDO细胞是研究非霍奇金淋巴瘤及其治疗的宝贵模型。

TOLEDO细胞特性特征

抗原表达: TOLEDO细胞表达CD10、CD19、CD20、CD38，但不表达CD23和CD39。
免疫表型: Toledo细胞不表达表面或细胞质免疫球蛋白。
细胞特性: Toledo细胞在体外培养中呈现出悬浮生长的特性，并且形态上与B淋巴母细胞相似。
TOLEDO细胞缺乏伯基特淋巴瘤的典型染色体易位、表现出多种染色体畸变
TOLEDO细胞对Epstein-Barr病毒（EBV）呈阴性、可用于免疫学研究和3D细胞培养、是研究非霍奇金淋巴瘤的重要模型系统

TOLEDO细胞参数表

细胞名称	TOLEDO细胞（人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞）
别名	Toledo
来源	成年白人女性患者的外周血
疾病	弥漫性大B细胞淋巴瘤
细胞类型	肿瘤细胞
形态	淋巴母细胞样，悬浮生长
生物安全等级	1
致瘤性	是
EBV状态	对Epstein-Barr病毒（EBV）呈阴性
抗原表达	CD10+、CD19+、CD20+、CD38+、CD23-、CD39-
免疫球蛋白表达	不表达表面或细胞质免疫球蛋白
染色体特征	缺乏伯基特淋巴瘤的典型染色体易位、表现出多种染色体畸变
培养基组成	RPMI-1640 + 20% FBS + 1% P/S
培养条件	37℃，5% CO2，饱和湿度
换液周期	每2-3天
培养基体积	T25瓶：10-12 ml；10 cm培养皿：12-15 ml
传代比例	1:2至1:4
注意事项	部分悬浮细胞可能附着于瓶底，轻轻晃动或吹打细胞面即可脱落，不需要胰酶消化。建议使用培养皿培养，更适合吹打细胞操作。
冻存液配方	92% FBS + 8% DMSO或 92% 完全培养基 + 8% DMSO
冻存规格	200-300万/ml，1ml每管
运输方式	干冰运输（冻存管），常温运输（T25瓶）
收到细胞后的处理	75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3小时；观察细胞状态，确认细胞生长情况。
细胞用途	免疫学研究，药物筛选：重要的非霍奇金淋巴瘤模型系统

培养教程

TOLEDO人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞培养教程

TOLEDO细胞复苏接种

从液氮罐中取出TOLEDO细胞冻存管，迅速在37℃水浴中融化，并轻轻摇晃以加速融化过程。
将融化的TOLEDO细胞悬液转移至含有培养基的离心管中，轻轻混匀后离心（900 rpm，3-5分钟），弃去上清。
加入预热的培养基重悬细胞，轻轻吹打以确保细胞均匀分散。
将细胞悬液均匀分配到T25培养瓶中，推荐接种密度为200-300万/ml。
将培养瓶放置于37℃、5% CO2的培养箱中进行培养。

TOLEDO细胞培养

每2-3天更换一次培养基。轻轻吸去旧培养基，加入新鲜的完全培养基。避免过度吸取细胞，以维持TOLEDO细胞的活性。
当TOLEDO细胞生长至80%汇合时，进行传代。步骤如下：
吸去旧培养基，用PBS洗涤细胞两次。
加入预热的胰酶-EDTA溶液，37℃孵育2-3分钟，使细胞脱落。
加入含血清的培养基终止胰酶作用，轻轻吹打细胞以形成单细胞悬液。
将细胞悬液按1:2至1:4的比例接种到新的培养瓶中，加入预热的培养基。

注意事项

细胞状态：TOLEDO细胞在生长过程中可能会有部分细胞附着于瓶底。轻轻晃动或吹打细胞可帮助其脱落。避免使用胰酶过度消化，以免对细胞造成损伤。
污染防控：在操作过程中使用无菌技术，以防止污染。定期检查培养箱和培养基，保持实验环境的洁净。
细胞冻存：TOLEDO细胞生长良好时，可以进行冻存。使用92% FBS和8% DMSO的冻存液，按照冻存步骤进行操作。

培养基pH值的控制

TOLEDO细胞系在pH值为7.2-7.4的范围内生长最佳。培养基中的碳酸氢盐缓冲系统有助于维持pH值，但细胞代谢产生的乳酸可能导致pH值降低。
定期检测培养基的pH值，适时补加碳酸氢钠溶液，或使用HEPES缓冲系统以维持pH稳定。