NCI-H23人非小细胞肺癌细胞培养教程

NCI-H23细胞复苏

• 将冻存细胞从液氮中快速取出，放置于37℃水浴中解冻。

• 解冻后立即将细胞悬液转移至含有15mL预热完全培养基的50mL离心管中。

• 以800rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 加入5mL新鲜完全培养基重悬细胞。

• 将细胞悬液转移至25cm²培养瓶中，置于37℃、5% CO2培养箱中培养。

NCI-H23细胞日常培养

• 培养温度：37℃，CO2浓度：5%，湿度：饱和湿度。

• 每3-4天更换一次培养基，保持细胞密度在70-80%的汇合度。

NCI-H23细胞传代

• 当细胞密度达到80-90%时进行传代。

• 弃去旧培养基，用PBS轻轻清洗细胞1-2次。

• 加入适量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37℃孵育5分钟。

• 在显微镜下观察细胞脱落情况。

• 加入等体积完全培养基终止消化，以800rpm离心5分钟。

• 弃去上清，用新鲜完全培养基重悬细胞。

• 按1:2或1:3的比例将细胞接种到新的培养瓶中。

NCI-H23细胞冻存

• 准备冻存液：90%完全培养基 + 10% DMSO。

• 收集对数生长期的细胞，以800rpm离心5分钟。

• 用预冷的冻存液重悬细胞，调整密度至1-2×10⁶/mL。

• 将细胞悬液分装到冻存管中，每管1mL。

• 将冻存管置于-80℃冰箱中，24小时后转移到液氮中长期保存。