Karpas-299细胞系是在1986年从一名25岁患有T细胞非霍奇金淋巴瘤的男性患者的外周血中分离。karpas299细胞系后来被归类为CD30阳性的间变性大细胞淋巴瘤（ALCL），其特征是携带NPM-ALK融合基因。karpas299细胞系的建立为研究间变性大细胞淋巴瘤提供了重要的实验工具。

Karpas-299细胞特性

• karpas299细胞形态学上表现为淋巴母细胞样，生长呈悬浮状态

• 细胞学和免疫表型分类为CD30阳性的间变性大细胞淋巴瘤

• 分子遗传学特征为携带NPM-ALK融合基因，是一种ALK阳性的细胞系

Karpas-299细胞参数表

Karpas-299人间变性大细胞淋巴瘤细胞培养教程

细胞复苏

• 从液氮中取出Karpas299细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，期间轻轻摇动冻存管以加快Karpas299细胞的解冻速度。

• 预先准备4mL的完全培养基（RPMI 1640培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素（P/S））用于Karpas299细胞的复苏。

• 将解冻后的1mL Karpas299细胞悬液缓慢加入到4mL的完全培养基中，轻轻混匀，以减少Karpas299细胞的损伤。

• 以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液以去除DMSO，保留Karpas299细胞沉淀。

• 加入1-2mL的完全培养基，轻轻重悬Karpas299细胞。

• 将重悬的Karpas299细胞悬液转移至培养瓶中，或在10cm培养皿中加入约8mL培养基，静置培养Karpas299细胞过夜，以恢复细胞活性。

细胞传代

• 次日检查Karpas299细胞生长情况，若细胞密度达到80%-90%，可进行传代。

• 弃去旧培养基，用无钙镁的PBS轻轻润洗Karpas299细胞1-2次，以去除残留的FBS和其他干扰物。

• 加入1mL的0.25%胰蛋白酶和0.53mM EDTA混合液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，直到Karpas299细胞变圆并开始脱落。

• 加入适量的完全培养基终止消化，轻轻混匀Karpas299细胞悬液。

• 以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液，保留Karpas299细胞沉淀。

• 向Karpas299细胞沉淀中加入6-8mL的完全培养基，轻轻混匀。

• 将Karpas299细胞悬液按1:2的比例分装至新的培养瓶或培养皿中，补充8mL的培养基，继续培养。

细胞冻存

• 选择生长状态良好的Karpas299细胞进行冻存操作。弃去培养基后，用PBS清洗Karpas299细胞。

• 加入1mL胰酶，待Karpas299细胞变圆且脱落后，加入1mL含血清的培养基终止消化。

• 以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液，保留Karpas299细胞沉淀。

• 加入1mL血清重悬Karpas299细胞，并按照细胞数量加入DMSO，使终浓度为10%。确保Karpas299细胞密度不低于1×10^6/mL。

• 将Karpas299细胞悬液迅速分装到已标记好的冻存管中。

• 将冻存管放入程序冻存盒中，置于-80℃冰箱中过夜，第二天转入液氮中长期保存Karpas299细胞。

• 如果没有程序冻存盒，可将Karpas299细胞冻存管放置在泡沫盒中，先在4℃静置5-10分钟，再转入-20℃静置2小时，最后移入-80℃冷冻过夜。

注意事项

• 培养条件：保持37℃、5% CO2和饱和湿度的培养环境，以确保Karpas299细胞的正常生长。

• 换液周期：每2-3天更换培养基，以维持适宜的营养环境和pH值，确保Karpas299细胞的健康生长。

• Karpas299细胞状态监测：定期检查Karpas299细胞状态，尤其注意污染和形态异常。如发现污染，需立即采取措施处理。

• 操作轻柔：操作过程中应尽量轻柔，避免产生气泡，以免影响Karpas299细胞的生长和状态。