NK-92MI细胞是一种经过基因修饰的自然杀伤（NK）细胞株，源自一位50岁患有急进性非霍奇金淋巴瘤的白人男性外周血单核细胞。NK-92MI细胞通过逆转录病毒MFG-hIL-2载体，将人白细胞介素-2（IL-2）的cDNA导入原始NK-92细胞中获得。这一基因修饰使NK-92MI细胞能够自主合成IL-2，从而不依赖外源性IL-2即可生长，这是其与亲本NK-92细胞的主要区别。

NK-92MI细胞呈淋巴母细胞样形态，悬浮生长并呈聚团状态。

NK-92MI细胞特性特征

• 细胞系衍生：NK-92MI细胞系通过基因工程手段从NK-92细胞系衍生而来，具体方法为利用逆转录病毒MFG-hIL-2载体将人白细胞介素-2（IL-2）的cDNA导入NK-92细胞中。

• 生长特性：NK-92MI细胞系无需外源性IL-2即可生长，而NK-92细胞系则依赖外源性IL-2。

• 阳性标记：CD2、CD7、CD11a、CD28、CD45、CD54、CD56。

• 阴性标记：CD1、CD3、CD4、CD5、CD8、CD10、CD14、CD16、CD19、CD20、CD23、CD34、HLA-DR。

• 细胞毒性：NK-92MI细胞对多种恶性细胞具有细胞毒性，包括杀死K562细胞和Daudi细胞，且其IL-2合成水平高于同源的NK-92CI细胞。

• NK-92和NK-92MI细胞广泛用于免疫学和癌症研究。

• 1998年9月，发现NK-92细胞的一种培养物受到支原体污染。通过使用BM-Cycline进行21天的治疗，成功清除污染。六周后，通过赫斯特染色、PCR和标准培养试验检测，均为阴性。

• NK-92细胞系对爱泼斯坦-巴尔病毒DNA序列检测呈阳性。

NK-92MI细胞参数表

NK-92MI人恶性非霍奇金淋巴瘤自然杀伤细胞培养教程

• 细胞解冻：

• 从液氮中取出冻存的NK-92MI细胞，迅速放入37°C的水浴中解冻1-2分钟。

• 解冻后，将NK-92MI细胞转移至含有10-12.5% FBS和1% P/S的培养基中，轻轻混匀以防止细胞损伤。

• 离心和重悬：

• 将NK-92MI细胞悬液转移至离心管中，以1000 rpm离心5分钟。

• 弃去上清液，加入适量新鲜培养基，轻轻重悬NK-92MI细胞沉淀。

• 细胞接种：

• 将重悬的NK-92MI细胞转移至培养瓶中，培养基体积通常为10-20 ml，根据NK-92MI细胞数量和培养瓶大小进行调整。

• NK-92MI细胞浓度应保持在2x10^5 - 1x10^6个/ml之间。

• 培养环境：

• 将NK-92MI细胞的培养瓶放入37°C，5% CO2的培养箱中，保持稳定的培养条件。

• 细胞观察与维护：

• 每2-3天检查NK-92MI细胞状态，注意观察是否有细胞聚团现象。

• 如果NK-92MI细胞出现较大细胞团，需轻轻吹打成小团，避免营养不足导致NK-92MI细胞死亡。注意操作轻柔，避免过度机械刺激。

• 培养基更换：

• 每2-3天更换NK-92MI细胞培养基，以提供新鲜营养物质并去除代谢废物。

• 传代：

• 当NK-92MI细胞生长至70-80%汇合时，进行传代，通常传代比例为1:3。

• 传代时，重复离心和重悬步骤，将NK-92MI细胞转移至新的培养瓶中。

注意事项

• 血清要求：NK-92MI细胞对血清质量较为敏感，建议使用优质胎牛血清。

• 温度敏感：NK-92MI细胞培养基和PBS在使用前应复温至37°C，避免温度骤变对NK-92MI细胞造成影响。

• 机械刺激：NK-92MI细胞对机械刺激敏感，操作时尽量轻柔，减少吹打次数。

• 冻存：如需冻存NK-92MI细胞，使用含10% DMSO的冷冻保护液。快速冷冻至-80°C后转移至液氮中保存。

• 细胞状态：除非实验需要，通常不建议将NK-92MI细胞完全吹散成单个细胞，以维持NK-92MI细胞的良好状态。