NALM-6细胞系来源于1976年复发的19岁急性淋巴细胞白血病（ALL）患者的外周血，是一种B细胞前体白血病细胞系，广泛应用于急性白血病研究。

NALM-6细胞系的建立促进了对白血病细胞代谢重编程的研究，包括糖酵解、脂质和碳水化合物代谢以及mTORC1途径相关基因的表达谱研究。nalm6细胞系在反向遗传学和全转录组分析中的应用，有助于解析白血病进展和耐药性的分子机制。
利用NALM-6细胞系的克隆变体（如G5克隆）和抗性细胞系（如高HPRT突变频率或抗性指数的C9克隆），可以深入了解白血病的异质性。对白血病细胞动力学的研究，特别是在糖皮质激素耐药性和MSH2表达背景下，有助于提出更有效的ALL治疗方法。
NALM-6细胞系还被用于研究治疗靶点的疗效和现有耐药机制，对细胞毒性试剂的敏感性及其在同源重组（HDR）修复功能中的作用。

NALM-6细胞呈淋巴细胞样形态，通常为圆形或卵圆形，细胞核较大，细胞质较少。

nalm6细胞系特性

• nalm6细胞代表早期B细胞发育阶段的白血病细胞

• nalm6细胞表达B细胞特异性标记物，如CD19和CD79a；缺乏表面免疫球蛋白（sIg）表达；表达终末脱氧核苷酸转移酶（TdT）

• nalm6细胞携带t(5;12)(q33.2;p13.2)染色体易位，导致ETV6-PDGFRB融合基因的形成

• nalm6细胞具有近二倍体核型、携带野生型p53基因、CDKN2A/B基因缺失

• 免疫表型：CD10+, CD19+, CD79a+, HLA-DR+，CD20-, CD34-

• 基因表达特点：高表达PAX5和EBF1等B细胞特异性转录因子、表达RAG1和RAG2基因，与V(D)J重组相关

• 药物敏感性：对某些靶向B细胞受体信号通路的抑制剂敏感、对某些DNA损伤诱导剂和拓扑异构酶抑制剂敏感

• nalm6细胞具有较高的基因编辑效率，特别适合CRISPR/Cas9介导的基因编辑、可用于研究B细胞发育和白血病发生机制

• nalm6细胞生长速度相对较快，细胞形态均一，适合形态学研究，可用于体外药物筛选和机制研究

nalm6细胞系参数表

细胞名称	Nalm6细胞系（人B淋巴白血病细胞系）
细胞别称	NALM-6 Nalm-6; NALM6; Nalm6; NALM6; Nalm6; NALM-6-M1
来源	19岁复发ALL患者外周血; 1976年建立
细胞类型	淋巴母细胞; 前B细胞; 人类B前体细胞白血病
物种	人源 (Homo sapiens)
生长特性	悬浮生长; 淋巴细胞样, 圆形或卵圆形; 直径约10-12μm; 核/细胞质比率高
培养基和环境	RPMI-1640 + 10-20% FBS; 37°C, 5% CO₂; 可选添加2mM L-谷氨酰胺
传代和维护	传代比例1:2-1:4; 2-3天/次换液; 密度维持在0.5-2 × 10⁶ cells/mL; 存活率>95%
抗生素	可选添加青霉素-链霉素 (100 U/mL)
冻存和复苏	冻存液: 90%培养基 + 10% DMSO; -80°C短期, 液氮长期; 37°C水浴快速解冻; 复苏后存活率>85%
染色体和基因	近二倍体 (46,XY); t(5;12)(q33.2;p13.2); ETV6-PDGFRB融合基因; 野生型p53; CDKN2A/B缺失
基因突变	NRAS突变 (G12D); KRAS野生型; FLT3野生型
表面标记	CD10+, CD19+, CD79a+, HLA-DR+, TdT+, CD22+, CD38+, CD45+; CD20-, CD34-, CD3-, CD13-, CD33-
细胞因子受体	IL-7R+; CXCR4+
特征性基因	PAX5↑, EBF1↑, IKZF1↑ (B细胞特异性转录因子); RAG1+, RAG2+ (V(D)J重组相关); BCL2↑ (抗凋亡)
生长和应用	生长速度较快 (倍增时间约24-36小时); 高基因编辑效率 (CRISPR/Cas9适用); 中等克隆形成能力
细胞周期	G0/G1期: ~50%, S期: ~30%, G2/M期: ~20% (可能因培养条件而变)
敏感药物	B细胞受体信号通路抑制剂; DNA损伤诱导剂; 拓扑异构酶抑制剂; 蛋白酶体抑制剂
耐药性	多药耐药性相对较低
关键蛋白	BCR-ABL阴性; MYC表达; MCL1表达
STR分析	具有特定的STR谱型 (可提供详细数据)
染色体稳定性	相对稳定，长期培养后核型变化较小
生物安全等级	BSL-1
检测结果	无菌 (细菌、真菌、支原体阴性); 病毒检测 (HIV、HBV、HCV阴性)
主要用途	白血病研究; 药物筛选; 基因功能研究; 信号通路研究; 免疫治疗研究
放射敏感性	对电离辐射相对敏感
转染效率	电转较高 (>60%); 脂质体转染中等 (30-50%)

nalm6人B淋巴白血病细胞系培养教程

细胞复苏步骤

• 从液氮中取出 NALM-6 细胞冻存管，迅速置于37°C水浴中快速解冻。

• 解冻后，将 NALM-6 细胞悬液转移到含有预热培养基的离心管中。

• 以1000 rpm离心4分钟，弃上清。

• 用新鲜培养基重悬 NALM-6 细胞，转移到培养瓶中。

日常培养

• 细胞密度：保持在0.5-2 × 10⁶ cells/mL之间。

• 换液频率：每2-3天换液一次。

• 观察：定期观察 NALM-6 细胞形态和生长状况。

传代方法

• 当 NALM-6 细胞密度达到80%-90%时进行传代，传代比例通常为1:2到1:4。

方法一（补充新鲜培养基）：

• 轻轻混匀培养瓶中的 NALM-6 细胞悬液。

• 按1:2到1:4的比例直接加入新鲜培养基稀释 NALM-6 细胞。

• 轻轻混匀后分装到新的培养瓶中。

方法二（离心换液）：

• 收集 NALM-6 细胞悬液到离心管中。

• 以900-1200 rpm（约250g）离心3-5分钟。

• 弃去上清，用新鲜培养基重悬 NALM-6 细胞。

• 按所需密度分装到新的培养瓶中。

细胞冻存

• 冻存液配方：55% 基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO

• 将 NALM-6 细胞密度调整到1-2 × 10⁶ cells/mL。

• 将 NALM-6 细胞悬液分装到冻存管中，每管1mL。

• 使用程序降温盒或细胞冻存容器，将 NALM-6 细胞缓慢降温至-80°C。

• 24小时后转移到液氮中长期保存。

注意事项

• 所有操作需在无菌条件下进行。

• 定期检查 NALM-6 细胞是否有污染。

• 避免 NALM-6 细胞过度生长或密度过低。

• 传代次数不宜过多，建议使用10代以内的 NALM-6 细胞。

• 定期进行支原体检测。

细胞状态监测

• 每天观察 NALM-6 细胞形态和密度。

• 使用台盼蓝染色法检测 NALM-6 细胞活力。

• 必要时进行 NALM-6 细胞周期分析和免疫表型检测。

传代的均匀性措施

• 充分混匀 NALM-6 细胞悬液：

• 轻轻摇晃或轻拍培养瓶，使 NALM-6 细胞充分悬浮。

• 使用移液器反复轻柔吹打 NALM-6 细胞悬液5-10次，确保细胞分散均匀。

  准确计数：

• 使用血球计数板或自动细胞计数仪准确计数 NALM-6 细胞浓度。

• 计数前再次轻轻混匀 NALM-6 细胞悬液，确保取样代表性。

  标准化操作：

• 制定标准操作流程（SOP），包括具体的混匀次数、离心参数等。

• 培训操作人员严格按照SOP执行，减少人为差异。

  使用适当的离心参数：

• 离心速度通常为900-1200 rpm（约250g），时间3-5分钟。

• 离心后轻轻重悬 NALM-6 细胞沉淀，避免形成细胞团块。

  均匀分装：

• 使用移液器多次轻柔吹打重悬后的 NALM-6 细胞，确保充分混匀。

• 缓慢均匀地将 NALM-6 细胞悬液分装到新的培养瓶中。

  控制细胞密度：

• 保持一致的传代密度，通常为0.5-2 × 10⁶ cells/mL。

• 定期监测 NALM-6 细胞生长曲线，确保传代时机的一致性。

  使用细胞筛网：

• 如果出现 NALM-6 细胞团块，可使用40-70μm的细胞筛网过滤细胞悬液。

  定期检查：

• 传代后24小时内检查各个培养瓶的 NALM-6 细胞状态，确保均匀性。

  记录和追踪：

• 详细记录每次传代的操作细节和观察结果。

• 定期分析数据，及时发现和解决潜在问题。