NCI-H209人小细胞肺癌细胞系培养教程

NCI-H209细胞复苏

• 从液氮中取出NCI-H209细胞冻存管，迅速置于37°C水浴中解冻。

• 解冻后立即将NCI-H209细胞悬液转移到含预热培养基的离心管中。

• 以800rpm离心5分钟，弃去上清。

• 用新鲜培养基重悬NCI-H209细胞，并转移到培养瓶中。

常规培养

• 生长状态：NCI-H209细胞以悬浮状态生长，形成多细胞聚集体。

• 培养基更换：每2-3天更换一次培养基。

• 细胞密度：保持NCI-H209细胞密度在1×10^5 - 1×10^6 cells/mL之间。

传代

• 传代比例通常为1:2至1:3。

• 收集NCI-H209细胞悬液，800rpm离心5分钟。

• 弃去上清，用新鲜培养基重悬NCI-H209细胞。

• 按所需比例分配到新的培养瓶中。

注意事项

• 只有聚集体中的NCI-H209细胞是有活力的，单个分散的细胞可能不具有生存能力。

• 培养基中通常含有大量NCI-H209细胞碎片，难以准确估计细胞存活率。

• 操作时需保持无菌环境，使用经过消毒的器材。

• 定期检查NCI-H209细胞形态和生长状况。

NCI-H209细胞冻存

• 收集对数生长期的NCI-H209细胞。

• 制备冻存液（90% FBS + 10% DMSO）。

• 调整NCI-H209细胞密度至1×10^6 cells/mL。

• 将NCI-H209细胞悬液分装到冻存管中，置于-80°C冰箱过夜。

• 次日转移到液氮中长期保存。

培养特性与注意事项

• 生长状态：NCI-H209细胞是悬浮生长的细胞，以多细胞聚集体形式存在。

• 活力细胞：只有聚集体中的NCI-H209细胞是有活力的，单个分散的细胞可能不具有生存能力。

• 细胞碎片：培养基中通常含有大量NCI-H209细胞碎片，难以准确估计细胞存活率。

培养条件控制

• 专用培养基：使用专用的NCI-H209细胞培养基，该培养基已包含细胞生长所需的各种成分。

• 培养环境：保持培养环境在37°C，5% CO2的条件下。

• 细胞密度：维持NCI-H209细胞密度在1×10^5 - 1×10^6 cells/mL之间。

传代和维护

• 观察：定期观察NCI-H209细胞生长状态，根据细胞密度决定传代时间。

• 传代：通过添加完全培养基来维持NCI-H209细胞的生长状态。

• 更换培养基：每2-3天更换一次培养基，以保证NCI-H209细胞有足够的营养。

避免污染的措施

• 严格遵守无菌操作规程，所有操作都在生物安全柜中进行。

• 使用经过灭菌的培养基、器皿和工具。

• 定期对培养环境进行消毒。

• 操作前后都要彻底清洁工作台面和手套。

• 避免使用含有抗生素的培养基长期培养，以防止潜在的耐药性污染。