hcmec/d3细胞系源自人类颞叶微血管（癫痫手术中切除的组织）。

hcmec/d3细胞特性

• hcmec/d3细胞系通过慢病毒载体转导与人端粒酶催化亚基（hTERT）和SV40大T抗原连续永生化。

• hcmec/d3细胞通过有限稀释克隆选择性分离CEC，经鉴定hCMEC/D3细胞系特定表型特征与脑内皮细胞（Cerebral Endothelial Cell, CEC）相符。

• hcmec/d3细胞系是一种稳定、易于生长的血脑屏障（BBB）模型。

• hcmec/d3细胞适用于药物摄取和主动转运研究，以及了解大脑内皮细胞对不同病原体和炎症刺激的反应。

• hcmec/d3细胞表达多种血脑屏障标志物，如CD34、CD31、CD40、CD105和CD144。

• hcmec/d3细胞可用于研究中枢神经系统（CNS）病理学、药物转运机制、神经毒性和神经系统细胞与分子机制。

hcmec/d3细胞参数表

hcmec/d3人脑微血管内皮细胞培养

细胞复苏过程

• 快速将冻存管放入37°C水浴中，摇动直至完全解冻（<1分钟）。

• 将解冻后的细胞转移至预先加热至37°C的离心管中，含有3 mL完全培养基。

• 在1000 rpm下离心5分钟，去除上清液。

• 使用新的完全培养基完全重悬细胞，确保细胞单个化，并将其接种到10cm培养皿中。

• 培养过夜，并在第二天进行液体更换并检查细胞密度。

细胞冻存过程

• 配置冻存液为血清：二甲基亚砜（DMSO）= 9:1的比例。

• 取长势良好、无细菌污染的hCMEC/D3细胞，汇合度达80%-90%。

• 使用含0.25% EDTA的胰蛋白酶溶液消化细胞（1-2分钟），并用完全培养基终止消化。

• 将细胞以1.5 mL冻存液重悬，并转移至预标记好的冻存管中。

• 标记好细胞种类、日期和操作者信息，并放入梯度冻存盒中。

• 置于-80°C冰箱中快速冷冻。

细胞传代过程

• 当hCMEC/D3细胞汇合达到80%时，丢弃旧的培养基。

• 用PBS润洗细胞两次，每次使用2 mL。

• 使用1 mL含0.25% EDTA的胰蛋白酶溶液消化细胞，放入培养箱中1-2分钟直至细胞圆形化。

• 使用1 mL完全培养基终止消化，用九宫格法将细胞吹落并收集至离心管中。

• 以800-1000 rpm室温离心5分钟，去除上清液。

• 使用2-3 mL完全培养基重悬细胞，确保细胞沉淀为单个状态。

• 将细胞以“Z”字形播撒至预先加入7 mL培养基的10cm培养皿中。

• 轻柔十字交错晃动并静置数分钟，然后放入37°C培养箱中培养。