CAL-62细胞系是1988年从一名70岁患有甲状腺未分化癌（thyroid anaplastic carcinoma, ATC）女性患者的右侧甲状腺组织中建立。cal62细胞以其快速增殖和显著的致瘤性而受到广泛关注，倍增时间约为24小时，使其在时间敏感的实验中尤为实用。

CAL-62细胞表现出独特的单层贴壁生长模式。CAL-62细胞系是研究甲状腺未分化癌生物学的重要模型，在癌症研究中具有显著的应用价值。

CAL62细胞系特性特征

• cal62细胞在异种移植裸鼠中表现出显著的致瘤性

• cal62细胞携带KRAS p.G12R突变、9p21.3位点发生改变

CAL62细胞系参数表

CAL62人未分化甲状腺癌细胞系培养教程

CAL62细胞复苏

• 将冻存的CAL62细胞管（含有1 mL细胞悬液）从液氮中取出，迅速放入37℃的水浴中解冻，期间轻轻摇动以均匀解冻。

• 准备4 mL预热至37℃的DMEM培养基，以便快速复苏CAL62细胞。

• 将解冻后的CAL62细胞悬液转移至离心管，随后以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液，确保分离出活性良好的CAL62细胞。

• 向CAL62细胞沉淀中加入1-2 mL新鲜的DMEM培养基，轻轻吹打混匀CAL62细胞，使其均匀分散。

• 将重悬后的CAL62细胞悬液转移至T25培养瓶或10 cm培养皿中，加入8 mL培养基。

• 将CAL62细胞培养瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中培养过夜，以确保CAL62细胞充分复苏并贴壁生长。

• 第二天观察CAL62细胞的生长情况，若细胞附着良好且密度适中，及时更换新鲜培养液。

CAL62细胞传代

• 判断传代时机：当CAL62细胞覆盖培养表面的80%-90%时，进行传代。

• 弃去培养基，用不含钙镁的PBS缓冲液清洗CAL62细胞1-2次，以去除残留的血清。

• 向培养瓶中加入1 mL消化液（0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA），在37℃下消化1-2分钟，期间观察CAL62细胞形态变化。

• 当CAL62细胞开始变圆并脱离培养表面时，立即取回操作台进行后续处理。

• 轻敲培养瓶底部以促进CAL62细胞脱落，随后加入含血清的培养基中和胰蛋白酶。

• 将CAL62细胞悬液转移至离心管，以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液。

• 将CAL62细胞重悬于适量的培养基中，按1:2或1:3比例将细胞分配至新的培养瓶或培养皿中，补加8 mL培养基。

CAL62细胞冻存

• 准备冻存：选择生长状态良好的CAL62细胞进行冻存，以确保长期保存的细胞质量。

• 弃去培养基后，用PBS清洗CAL62细胞，加入1 mL胰蛋白酶消化，待细胞完全脱落后，加入等体积的含血清培养基终止消化。

• 将CAL62细胞悬液转移至离心管，以1000 RPM离心4分钟，弃去上清液。

• 用血清重悬CAL62细胞，使其密度达到1 x 10⁶/mL以上。

• 向重悬的CAL62细胞中加入适量DMSO，使终浓度达到10%，轻轻混匀。

• 将1 mL CAL62细胞悬液分装入冻存管，做好标识。

• 将冻存管放入程序降温盒中，以每分钟1℃的速率降温至-80℃，随后转移至液氮中长期保存CAL62细胞。

注意事项

• 无菌操作：所有操作均需在无菌环境下进行，以防止CAL62细胞污染。

• 细胞观察：应每天观察CAL62细胞形态，确保CAL62细胞健康。健康的CAL62细胞应呈现上皮样形态，并具有良好的折光性。

• 污染管理：若发现CAL62细胞污染，应立即采取措施隔离，并根据情况决定是否废弃污染的CAL62细胞。