KHM-5M细胞是一种来源于日本男性患者的未分化甲状腺癌细胞系，原发于其右颈前区和锁骨上区的硬肿瘤的胸腔积液转移病灶。KHM-5M细胞表现出产生中性粒细胞趋化因子白介素8（IL-8）的能力，用于研究肿瘤免疫病理学和细胞因子在肿瘤微环境中作用等。

KHM-5M细胞在裸鼠体内移植时能引起中性粒细胞的浸润，进一步验证了趋化活性。实验中使用了改良的Boyden室技术来评估细胞的趋化能力，并通过DNA克隆技术鉴定了其产生的细胞因子，包括白介素8。

KHM5M细胞特性

• KHM5M细胞为未分化甲状腺癌（ATC）细胞。

• KHM5M细胞为成纤维细胞样，生长时贴壁生长。

• KHM-5M细胞能够产生中性粒细胞趋化因子，即白介素8（IL-8）。

• KHM5M细胞用于研究癌症免疫病理学和细胞因子在肿瘤微环境中的作用。

• KHM5M细胞在裸鼠体内移植显示中性粒细胞浸润，证明其趋化活性。

• KHM5M细胞使用改良的Boyden室技术证明了细胞的趋化活性。

KHM5M细胞参数表

KHM5M人甲状腺癌细胞(未分化)培养教程

冻存细胞的复苏

• 将含有1mL KHM-5M细胞悬液的冻存管放置在37℃水浴中快速摇晃解冻。

• 将解冻的KHM-5M细胞悬液加入到含4-6mL完全培养基的离心管中，混合均匀。

• 在1000 RPM条件下离心3-5分钟，弃去上清液，用完全培养基重悬KHM-5M细胞。

• 将重悬的KHM-5M细胞悬液加入含6-8mL完全培养基的培养瓶（或皿）中，在37℃培养箱中培养过夜。

• 第二天使用显微镜观察KHM-5M细胞生长情况和细胞密度。

细胞传代

• 当KHM-5M细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗KHM-5M细胞1-2次。

• 加入0.25%（w/v）胰蛋白酶和0.53 mM EDTA于培养瓶中（例如T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），在37℃培养箱中消化1-2分钟。

• 观察KHM-5M细胞消化情况，若大部分细胞变圆并脱落，迅速拿回操作台轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10% FBS的培养基终止消化。

• 轻轻打匀后吸出，在1000 RPM条件下离心3-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

• 将KHM-5M细胞悬液按1:2的比例分到新的T25瓶中，添加6-8mL新鲜配置的完全培养基以保持细胞的生长活力。

• 后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

细胞冻存

• 在KHM-5M细胞培养的前3代建议冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

• 收集消化好的KHM-5M细胞到离心管中，根据实际需求使用血球计数板计数，确定细胞的冻存密度（一般推荐为1×10^6~1×10^7个活细胞/mL）。

• 在1000 RPM条件下离心3-5分钟，去掉上清液，用配制好的细胞冻存液重悬细胞。

• 将KHM-5M细胞按每1mL冻存液含1×10^6~1×10^7个活细胞/mL分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

• 将冻存的KHM-5M细胞置于程序降温盒中，过夜在-80℃冰箱冷冻，之后转移到液氮容器中长期保存。

• 记录冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。