SNU-449细胞（人肝癌细胞）

SNU-449人肝癌细胞系是由J.-G. Park及其同事于1990年从一名52岁韩国男性的原发性肝细胞癌组织中分离建立。在细胞分离之前，患者未接受过任何化疗。该肿瘤为单发结节，并伴有向结节周围的扩展，组织学上以致密型和小梁型为主。
SNU-449细胞系为非整倍体，模态数为57。由于SNU-449细胞来源于原发性肝细胞癌，并携带HBV DNA序列，已被广泛应用于肝癌的相关研究中，成为探索肝癌发病机制的重要细胞模型。

SNU-449细胞特性特征

病毒检测：通过Southern blot杂交检测到乙型肝炎病毒（HBV）DNA，但未检测到HBV基因组RNA，对HBV DNA序列呈阳性。
SNU-449细胞系对乙型肝炎病毒DNA序列的存在呈阳性。
SNU-449细胞最初在添加了5%热灭活胎牛血清的ACL-4培养基中培养。建立后，将培养细胞保存在补充有10%热灭活胎牛血清的RPMI 1640培养基中。
肿瘤特征：原发肿瘤为单发结节，伴有结节周围的延伸。组织学上主要表现为致密型和小梁型结构。
细胞核特征：培养的SNU-449细胞中可见单核或双核

SNU-449细胞参数表

细胞名称	SNU-449细胞（人肝癌细胞）
细胞别称	SNU449; NCI-SNU-449
种属来源	人（Homo sapiens）
性别/年龄	男；52岁
组织来源	肝脏
疾病类型	原发性肝细胞癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC），分级II-III/IV
生长特性	贴壁生长
细胞形态	上皮细胞样
细胞代数	10代以内
细胞规格	1×10^6 cells/T25培养瓶或1mL冻存管包装
保藏机构	ATCC (CRL-2234)，KCLB (00449)
支原体检测	无
培养基	RPMI-1640 + 10%热灭活胎牛血清（FBS） + 1%青霉素/链霉素（PS）
培养条件	温度：37℃；气相：95%空气 + 5%二氧化碳
冻存条件	无血清冻存液，液氮储存
供应限制	仅限于科学研究，不可用于治疗
收货方式	T25瓶或冻存管
收货处理	观察细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁，将T25瓶置于37℃培养箱放置2-4小时
传代密度	细胞密度达80%-90%时进行传代
传代比例	首次传代建议1:2
传代方法	用PBS润洗细胞1-2次，弃去上清液
冻存液配方	无血清冻存液，液氮储存
冻存方法	收集细胞后离心，弃去上清液，加无血清冻存液使细胞密度5x10^6~1x10^7/mL

培养教程

SNU-449人肝癌细胞培养教程

细胞复苏

水浴锅：预热至37℃。
培养基准备：使用RPMI 1640培养基，补充10%热灭活胎牛血清（FBS），并提前预热至37℃，以适应SNU449细胞的培养需求。
将冻存的SNU449细胞管从液氮中取出，迅速放入37℃的水浴锅中，轻轻摇动直至细胞完全解冻（约1-2分钟）。
解冻后，迅速将SNU449细胞悬液转移至含4 mL预热培养基的离心管中，轻轻混匀。
以1000 RPM离心4分钟，弃去上清。
加入1-2 mL新鲜培养基重悬SNU449细胞，并轻轻吹打混匀。
将重悬后的SNU449细胞转移至T25培养瓶或10 cm培养皿中，加入约8 mL培养基。
置于37℃、5% CO2培养箱中培养，通常过夜后第二天更换培养基，观察SNU449细胞的密度及生长状态。

SNU449细胞传代

当SNU449细胞生长密度达到80%-90%时，应进行传代。
弃去旧的培养基，用无钙、镁的PBS润洗SNU449细胞1-2次，以去除残余的血清和废物。
加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA溶液，37℃下消化1-2分钟。
观察显微镜下，当SNU449细胞呈圆形并部分脱落时，迅速将消化液弃去，加入新鲜培养基终止消化。
将SNU449细胞悬液以1000 RPM离心4分钟，弃去上清。
重悬于1-2 mL新鲜培养基中，吹打混匀后按1:2的比例进行传代，将SNU449细胞接种至新的培养瓶或培养皿中，并加入足够的培养基（通常8 mL）。

SNU449细胞冻存

在SNU449细胞生长状况良好时进行冻存操作。弃去培养基，用PBS清洗SNU449细胞1次。
加入1 mL胰蛋白酶消化SNU449细胞，待细胞脱落后，加入培养基终止消化。
将SNU449细胞以1000 RPM离心4分钟，弃去上清。
根据细胞数量重悬于含10% DMSO和90% FBS的冻存液中，确保SNU449细胞浓度为1×10^6细胞/mL。
每个冻存管中加入1 mL SNU449细胞悬液，标记好细胞信息。
将冻存管置于程序降温盒中，放置于-80℃冰箱中冷冻24小时后转移至液氮罐中长期保存。