SNU-475细胞系于1990年从一位韩国患者的原发性肝细胞癌中提取，患者在细胞毒性治疗前提供了肿瘤组织样本。最初，这些细胞在含有5%热灭活胎牛血清的ACL-4培养基中培养，随后转移至补充10%热灭活胎牛血清的RPMI 1640培养基中进行长期培养。SNU-475细胞系在肝癌研究中具有重要的实验价值。

SNU475细胞特性特征

• SNU-475细胞系为非整倍体，其模态编号为61。

• SNU475细胞抗原表达为AB型血,Rh阳性。

• 原发肿瘤为巨大生长型,组织学类型主要为致密型和小梁型。

• 培养的SNU475细胞呈现多核表型。

• SNU-475细胞系已验证为乙型肝炎病毒（HBV）DNA阳性，但未检测到HBV基因组RNA的表达。

SNU475细胞参数表

SNU475人肝癌细胞培养教程

SNU475细胞复苏

• 将冷冻的SNU475细胞悬液冻存管在37℃水浴中迅速摇动解冻，避免过度加热导致SNU475细胞损伤。

• 解冻后，立即将SNU475细胞悬液转移至含有4 mL RPMI-1640培养基（补充10%胎牛血清）的离心管中，混合均匀。

• 以1000 rpm的速度离心3分钟，去除上清液以除去冷冻保护剂，确保SNU475细胞的活性。

• 用1-2 mL培养基重新悬浮SNU475细胞，轻轻吹打使细胞分散均匀。

• 将SNU475细胞悬液转移至培养瓶或10 cm培养皿中，加入适量的培养基（约8 mL），放置在37℃、5% CO2培养箱中培养过夜。

• 第二天更换新鲜培养基，并检查SNU475细胞的密度和状态。

SNU475细胞传代

• 当SNU475细胞覆盖面积达到80%-90%时，进行传代操作。

• 弃去培养基，用不含钙镁离子的PBS溶液洗涤SNU475细胞1-2次，以去除残留的血清和培养基成分。

• 加入1 mL消化液（0.25%胰蛋白酶和0.53 mM EDTA的混合溶液），确保消化液完全覆盖SNU475细胞单层。

• 弃去消化液，将培养瓶放入37℃培养箱中消化约1分钟。

• 观察SNU475细胞，待大部分细胞变圆并开始脱落时，轻轻敲打培养瓶，立即加入少量培养基终止消化。

• 加入6-8 mL培养基，将SNU475细胞悬液转移至无菌离心管中，1000 rpm离心4分钟，去除上清液。

• 将SNU475细胞按1:2的比例分配到新的培养瓶或培养皿中，加入8 mL新鲜培养基，继续在培养箱中培养。

SNU475细胞冻存

• 在SNU475细胞状态良好时，收集细胞并转移至无菌离心管中，1000 rpm离心4分钟，去除上清液。

• 用PBS溶液清洗SNU475细胞一次，去除残余的培养基，随后进行细胞计数。

• 按SNU475细胞计数加入无血清细胞冻存液，使细胞密度达到5×10^6至1×10^7/mL，混合均匀。

• 将1 mL SNU475细胞悬液分装至冻存管中，并做好标识。

• 将SNU475细胞冻存管先放置于-80℃冰箱中预冻24小时，然后转入液氮罐中长期储存。

注意事项

• 操作过程中应严格保持无菌条件，防止污染SNU475细胞。

• 定期监测SNU475细胞的生长情况，确保细胞处于良好状态。

• 在传代过程中，避免过度消化SNU475细胞，以免影响细胞的活力和生长能力。