JHH-7细胞（人肝癌细胞）

JHH-7细胞系是由日本千叶医科大学肝癌研究所于1986年建立的，来源于一名53岁日本男性患者的肝脏组织。患者患有肝细胞癌，并且病史显示为HBsAg阳性，伴有肝硬化。患者的血清学指标包括HBsAg（+），HBsAb（-），HBeAg（-），HBeAb（+），HBc-Ab（+），以及AFP高水平（110000 ng/mL）。
JHH-7细胞系是从肝硬化并发肝细胞癌的患者肝脏肿瘤组织中建立的，并携带部分乙肝病毒基因片段。

JHH-7细胞特性特征

遗传特征：JHH-7细胞系中观察到HBV（乙型肝炎病毒）DNA的整合现象，但整合的HBV基因组不完整，因此不产生乙肝病毒。
PCR检测结果显示乙肝病毒基因组片段呈阳性，JHH-7细胞可能携带部分病毒基因组。
HindIII酶切分析显示6.0Kb和2.5Kb的DNA片段，进一步支持HBV DNA的整合特征。
JHH-7细胞系在基因表达方面表现出与肝癌相关的多种基因的异常表达，这使其成为研究肝癌生物学特性的理想模型

JHH-7人肝癌细胞参数表

细胞名称	JHH-7细胞（人肝癌细胞）
别称	Jhh-7; JHH7; FLC-7; FLC7; Functional Liver Cell-7
细胞类型	人肝癌细胞
建立单位	日本千叶医科大学肝癌研究所
建立年份	1986年
来源	53岁日本男性肝癌患者肝脏组织
病理特征	HBsAg阳性肝细胞癌，伴有肝硬化
AFP水平	110,000 ng/mL
生长特性	贴壁生长，上皮样
遗传学特征	HBV-DNA整合，但不完整，不产病毒
HindIII酶切分析	6.0Kb和2.5Kb的DNA片段
培养基	DMEM/F12+10% FBS+1% P/S
培养条件	气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃
传代比例	1:02
传代频率	每3-4天一次
冻存液	90% FBS + 10% DMSO
冻存密度	≥1×10^6 cells/mL
冻存条件	-80°C冰箱或液氮
细菌/真菌污染	无
支原体污染	无
应用领域	肝癌发病机制、药物治疗、基因表达等研究

培养教程

JHH-7人肝癌细胞培养教程

JHH7细胞复苏步骤

迅速将冻存的JHH7细胞悬液（1 mL）置于37℃水浴中，持续轻轻摇动至完全解冻。
解冻后，立即将JHH7细胞悬液加入到4 mL预温的培养基中，并轻轻混匀。
将JHH7细胞悬液置于1000 rpm下离心3分钟，弃去上清液。
加入1-2 mL新鲜培养基，轻轻吹打混匀JHH7细胞。
将所有JHH7细胞悬液转移至培养瓶或培养皿中，培养基的体积约为8 mL，并在37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。
第二天更换培养基，观察并记录JHH7细胞密度和状态。

JHH7细胞传代步骤

当JHH7细胞生长密度达到80%-90%时，开始进行传代培养。
弃去培养上清，用无钙、无镁的PBS缓冲液润洗JHH7细胞1-2次。
在培养瓶中加入1 mL 0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA消化液，确保消化液覆盖所有JHH7细胞。
短暂弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中，观察JHH7细胞的消化状态，通常1-2分钟。
当大部分JHH7细胞变圆并开始脱落时，立即加入培养基终止消化并轻轻敲击培养瓶以帮助细胞脱落。
补充6-8 mL培养基，混匀后将JHH7细胞悬液转移至无菌离心管中，1000 rpm离心4分钟，弃去上清。
使用1-2 mL新鲜培养基重悬JHH7细胞，轻轻吹匀。
按1:2比例将JHH7细胞悬液分装至新的培养瓶或培养皿中，加入8 mL培养基后继续在培养箱中培养。

JHH7细胞冻存步骤

JHH7细胞生长良好时，将细胞悬液与培养基一同收集至无菌离心管中，1000 rpm离心4分钟，弃去上清，并用PBS清洗JHH7细胞一次。
进行JHH7细胞计数，确保细胞密度在5×10⁶至1×10⁷/mL之间。
根据JHH7细胞数量加入无血清冻存液，轻轻混匀。每个冻存管中分装1 mL细胞悬液，并做好标识。
将JHH7细胞冻存管置于-80℃冰箱中24小时后，转移至液氮罐中长期储存，并记录冻存管的位置以便后续取用。

注意事项

无菌操作：在整个JHH7细胞实验过程中，需严格保持无菌操作以防止细胞污染。
消化时间控制：消化步骤中要特别注意时间，避免过度消化导致JHH7细胞损伤或死亡。
细胞状态监控：定期检查JHH7细胞的生长状态，及时进行传代或冻存，以维持细胞的最佳状态。