HSEC细胞（人肝窦内皮细胞永生化）

HSEC人肝窦内皮细胞永生化（Hepatic Sinusoidal Endothelial Cells, HSEC）是一种通过慢病毒转染而实现永生化的细胞系，起源于人类正常肝脏组织中的原代肝窦内皮细胞。肝窦内皮细胞是肝脏中数量最多的非实质细胞，约占肝非实质细胞总数的70%。它们在调节血液与肝实质之间的物质交换中发挥着重要作用。

与普通毛细血管内皮细胞相比，HSEC细胞缺乏细胞间连接和基底膜，具有较高的通透性，这一特性对于肝脏的功能至关重要。在适宜的培养条件下，HSEC永生化细胞系能够稳定传代至少20代以上，同时保留了肝窦内皮细胞的主要特性，如其独特的窗孔结构和高通透性。HSEC永生化细胞培养中有见漂浮颗粒物、漂浮细胞和部分形变细胞，来源于转化和筛选过程，为正常现象，多见于永生化细胞。

HSEC永生化细胞特性特征

高通透性：由于缺乏细胞间连接和基底膜，HSEC细胞具有较高的通透性，适合用于研究物质在血液与肝实质之间的交换。
代谢特性：HSEC细胞能够合成和分泌一些肝脏特异性蛋白，如白蛋白，反映其在肝脏功能方面的特性。

HSEC人肝窦内皮细胞参数表

细胞名称	HSEC细胞（人肝窦内皮细胞永生化）
细胞别称	HSEC
来源	人类正常肝脏组织中的原代肝窦内皮细胞
细胞形态	内皮细胞样
细胞类型	贴壁细胞
生长特性	适应性强，能够在体外稳定增殖
生物安全等级	2
致瘤性	无致瘤性
培养条件	内皮细胞专用培养基
培养环境	37℃；5% CO2；饱和湿度
细胞简介	HSEC细胞是通过慢病毒携带永生化基因而建立的永生化细胞，合适条件下至少可以稳定传代15-20代左右。
换液周期	每2-3天
培养基	内皮细胞专用培养基
传代比例	1:2（具体情况视细胞生长速度及密度决定）
冻存液	冻存液：55%基础培养基+40% FBS+5% DMSO 温度：液氮
冻存规格	200-300万细胞/ml，1ml每管
细胞标志物	表达血管假性血友病因子（vWF）、CD31等内皮细胞特异性标志物
功能特性	能合成和分泌肝脏特异性蛋白，如白蛋白和糖原
高通透性特性	由于缺乏细胞间连接和基底膜，具有较高的通透性
研究领域	肝脏疾病机制研究、药物筛选、免疫反应研究、再生医学适用于肝脏相关的生物学和病理学研究用于评估药物对肝脏的代谢和毒性影响研究肝脏内细胞间的相互作用及其对肝脏功能的影响

培养教程

HSEC人肝窦内皮细胞永生化培养教程

培养步骤

确保所有试剂和材料在操作前均已恢复至室温，特别是用于HSEC细胞培养的试剂。
使用75%酒精消毒操作台及培养瓶外表面，确保HSEC细胞培养环境的无菌性。
小心吸尽培养瓶中的旧培养基，避免HSEC细胞干燥。
加入3-4 ml常温PBS，轻轻摇动以洗涤HSEC细胞，持续10-20秒，随后吸走PBS。
向T25瓶中加入约1 ml的0.25%胰酶，轻轻摇晃培养瓶，使胰酶均匀覆盖HSEC细胞层。
将培养瓶置于37℃培养箱中，观察HSEC细胞开始收缩和脱离培养基底。
当HSEC细胞间隙扩大且细胞尚未完全脱离时，可轻拍培养瓶助脱并加入2-3 ml完全培养基以中和胰酶作用。
轻轻混匀HSEC细胞悬液以确保均匀分布。
将HSEC细胞悬液转移至离心管，1000 rpm离心3-5分钟，弃去上清液。
在HSEC细胞沉淀中加入适量新鲜培养基，轻轻重悬HSEC细胞。
将HSEC细胞均匀分配至新的培养瓶中。
添加适量的完全培养基，确保HSEC细胞在合适的环境中生长。
将培养瓶放回37℃培养箱中，继续培养HSEC细胞。

注意事项

消化时间：不同品牌胰酶的活性可能有所不同，因此应严格控制HSEC细胞的消化时间。建议每30秒观察HSEC细胞状态，避免过度消化。
HSEC细胞状态监测：在传代和换液过程中，密切关注HSEC细胞状态，避免HSEC细胞过度聚集或大面积脱落。
培养基更换：每2-3天更换培养基，以保持HSEC细胞生长的最佳环境。
传代比例：根据HSEC细胞的生长密度和状态，通常采用1:2的传代比例。
HSEC细胞冻存：如需冻存HSEC细胞，建议使用培养基+45% FBS + 5% DMSO的冻存液。在冻存前，应确保HSEC细胞充分消化并通过离心收集。