Hep3B2.1-7（也称为Hep 3B、Hep-3B、Hep3B）是一种人类肝癌细胞系，源自一名8岁黑人青年的肝脏组织。hep3b细胞系表现为上皮形态，并含有整合的乙型肝炎病毒基因组，适合用作转染实验的宿主。

hep3b细胞系的模态染色体数为60，其中包含82个亚梯形模态，并且1号染色体出现了重排现象。Hep3B细胞呈多角形，并具有紧密的细胞连接。Hep3B细胞系由于其高增殖能力和稳定的遗传特性，广泛应用于肝癌相关的实验研究。

Hep3B细胞特性特征

• 致瘤性：hep3B细胞在裸鼠体内能够形成肿瘤，表明其具有致瘤特性。

• 基因组：Hep3B细胞系包含完整的乙型肝炎病毒（HBV）基因组，适合用于研究HBV与肝癌之间的关系。

• 基因表达：甲胎蛋白（AFP，甲胎蛋白）；乙型肝炎表面抗原（HBsAg）；白蛋白；α2-巨球蛋白；α1-抗胰蛋白酶；转铁蛋白，α1-抗糜蛋白酶；触珠蛋白；铜蓝蛋白；纤溶酶原补体（C3、C4）、C3激活剂；纤维蛋白原；α1酸性糖蛋白，α2-HS糖蛋白；β脂蛋白；视黄醇结合蛋白

• 转染宿主：Hep3B细胞系是合适的转染宿主，常用于基因功能研究和药物筛选。

• 增殖能力：在适宜的培养条件下，Hep3B细胞能够快速增殖，适合大规模培养

Hep3B细胞参数表

Hep3B2.1-7人肝癌细胞培养教程

Hep3B细胞复苏

• 快速解冻：从液氮罐中取出Hep3B细胞冻存管，立即放入37℃水浴中，轻轻摇动冻存管，使其均匀解冻。Hep3B细胞的解冻过程应在1-2分钟内完成，以防细胞长时间暴露于高温下。

• 添加培养基：解冻后的Hep3B细胞悬液迅速转移至含有10% FBS的温预培养基中，轻轻混匀以降低DMSO的毒性。

• 细胞清洗：将Hep3B细胞悬液以1200 rpm离心3分钟，去除上清液，消除DMSO。

• 重悬Hep3B细胞：使用新鲜的预温培养基重悬Hep3B细胞，并调整细胞浓度至适当水平。

• 接种：将Hep3B细胞均匀接种到T25培养瓶中，并加入适量的培养基，以确保Hep3B细胞在初期能充分获得营养。

Hep3B细胞培养

• 在37℃、5% CO₂环境下孵育Hep3B细胞。

• 初次接种后的2-4小时内，静置培养以促进Hep3B细胞附壁。随后，可轻轻晃动培养瓶检查Hep3B细胞的附壁情况。

• 换液频率：每2-3天更换一次培养基，去除老化Hep3B细胞和代谢废物，补充新鲜养分。

Hep3B细胞传代

• 准备工作：在进行Hep3B细胞传代前，准备好新鲜的培养基和预温的PBS溶液。

• 吸出培养液：小心吸出培养瓶中的旧培养基，避免扰动附壁的Hep3B细胞。

• 细胞洗涤：向培养瓶中加入约2 mL PBS，轻轻摇晃后吸出并丢弃，以去除残留的血清。

• Hep3B细胞消化：入1 mL的0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，轻轻摇动使其覆盖所有Hep3B细胞。将培养瓶置于培养箱中，观察Hep3B细胞形态变化。通常在2-3分钟内，Hep3B细胞会开始变圆并逐渐脱壁。

• 终止消化：加入3 mL含10% FBS的培养基中和胰蛋白酶，轻轻吹打培养瓶以形成单细胞悬液。

• 离心：将Hep3B细胞悬液以1200 rpm离心3分钟，去除上清液。

• 重悬和接种：用新鲜培养基重悬Hep3B细胞后，按1:2或1:3的比例接种至新培养瓶中，继续培养。

Hep3B细胞冻存

• 准备冻存液：配制55%的基础培养基、40%的FBS和5%的DMSO混合液，确保DMSO浓度不超过5%，以保护Hep3B细胞在冻存过程中的活力。

• 离心Hep3B细胞：将Hep3B细胞悬液离心去除培养基。

• 重悬Hep3B细胞：用冻存液重悬Hep3B细胞，细胞浓度调整至1×10^6 cells/mL。

• 冻存：将Hep3B细胞悬液分装入冻存管中，逐渐降温至-80℃后，转移至液氮中长期保存。