HuH-6细胞系是一种人类肝母细胞瘤细胞系，于1982年从一名57岁日本男性的肝癌组织中建立。huh6细胞系展现出上皮细胞样的形态，并能够合成球蛋白和甲胎蛋白，被广泛用于肝癌和相关疾病的研究中。

HuH-6细胞的主要用于研究丙型肝炎病毒（HCV）感染和肝癌。在药物代谢和药代动力学领域，huh6细胞被用于通过分析各种CYP450酶的基因表达来评估药物相互作用（DDI）的潜力。另一个重要应用是研究转运蛋白介导的药物外排抑制。通过在胶原蛋白基质上培养这些肝细胞，并用基底膜提取物覆盖，可以形成极化的细胞表面结构，从而促进胆汁外排转运蛋白的重新表达。这种方法有助于分析代谢速度较慢的药物，以开发出在体内更持久有效的药物。

HuH-6细胞系特性特征

• 蛋白表达：HuH-6细胞能够合成球蛋白和甲胎蛋白。

• 基因表达：HuH-6细胞系的基因表达特征使其成为研究药物代谢和药代动力学的理想模型，尤其是通过分析细胞色素P450（CYP450）酶的表达来评估药物相互作用（DDI）的潜力。

• 转运蛋白：HuH-6细胞可用于研究转运蛋白介导的外排抑制。通过在胶原蛋白上镀肝细胞并覆盖基底膜提取物，可以形成极化的细胞表面结构，并重新表达胆汁外排转运蛋白。

HuH-6细胞系参数表

HuH-6人肝母细胞瘤细胞系培养教程

HuH6细胞复苏

• 解冻: 将存有1mL HuH6细胞悬液的冻存管迅速置于37℃水浴中，轻轻摇晃直至完全解冻。

• 培养基处理: 将解冻后的HuH6细胞悬液转移至离心管中，加入4mL含89% DMEM、10%胎牛血清（FBS）和1%双抗的培养基，轻轻混匀。

• 离心: 在1000rpm离心4分钟，弃去上清液。

• 重悬: 加入1-2mL新鲜培养基，将HuH6细胞悬液轻轻吹匀后，转移至T25培养瓶中，置于培养箱中培养过夜。

• 换液与检查: 第二天更换新鲜培养基，并检查HuH6细胞的密度及状态。

HuH6细胞传代

• 传代时机: 当HuH6细胞达到80%-90%汇合度时，即可进行传代操作。

• PBS清洗: 弃去培养上清液，用PBS（磷酸盐缓冲液）润洗HuH6细胞1-2次，以去除残余血清。

• 细胞消化: 加入1mL 0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，期间在显微镜下观察HuH6细胞的消化进展。当大部分HuH6细胞变圆并开始脱落时，迅速取回操作台。

• 终止消化: 轻敲培养瓶，加入适量含血清的培养基终止消化过程。

• 离心与重悬: 将HuH6细胞悬液转移至离心管中，补充培养基至6-8mL，在1000rpm离心4分钟，弃去上清液后，加入1-2mL培养基，轻轻吹匀。

• 分瓶: 按1:2比例将HuH6细胞悬液分至新的T25培养瓶中，每瓶补加8mL培养基，并将其置于培养箱中继续培养。

HuH6细胞冻存

• 冻存准备: HuH6细胞生长状态良好且密度适当时，可进行冻存操作。

• PBS清洗与消化: 弃去培养基，加入PBS清洗HuH6细胞1次，然后加入1mL胰蛋白酶消化，待HuH6细胞变圆脱落后，加入1mL含血清的培养基终止消化。

• 离心与重悬: 在1000rpm离心4分钟，弃去上清液。根据HuH6细胞数量加入适量血清，将细胞重悬。

• 冻存液制备: 根据需要加入10% DMSO至HuH6细胞悬液中，轻轻混匀。确保HuH6细胞密度不低于1×10^6/mL，每支冻存管分装1mL细胞悬液。

• 冻存与标识: 确保冻存管已正确标识，使用梯度降温法将HuH6细胞缓慢降温至-80℃，最终储存于液氮罐中以保持长期活性。