来源：肺
细胞特征：贴壁细胞 , 成纤维细胞样
培养基：生长培养基：RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S
其他：msto-211h细胞表达神经元特异性烯醇酶(NSE)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)的α与β亚基
MSTO-211H细胞株于1985年从一名62岁男性的胸腔积液中（患有肺双相间皮瘤并接受过多种化疗药物联合治疗）分离，患者在细胞株建立前未接受过放疗。

MSTO-211H细胞系表现出成纤维细胞样形态，细胞株的模态数为72，范围在70至78之间。
在培养过程中，MSTO-211H细胞的饱和密度可达每平方厘米400000个细胞。当细胞达到这一密度时，会开始从培养表面脱落。

msto-211h细胞分子表达

• msto-211h细胞表达高亲和力的EGF结合位点

• msto-211h细胞表达神经元特异性烯醇酶(NSE)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)的α与β亚基

• msto-211h细胞过表达c-myc原癌基因,但未观察到基因重排或扩增

• V-src、v-abl、v-erbB、c-raf1、Ha-ras、Ki-ras和N-ras的表达呈阳性

• 未检测到N-myc、L-myc、c-myb、c-fos、v-fes、v-fms和v-sis癌基因的表达

• 未检测到左旋多巴胺脱羧酶(DDC)、邦巴辛与神经Tensin的表达

msto-211h细胞参数表

培养教程

msto-211h人肺癌细胞培养教程

MSTO-211H细胞复苏

• 将冻存的MSTO-211H细胞从液氮中取出，迅速置于37°C水浴中融化。

• 将MSTO-211H细胞悬液转移到含有预热完全培养基的培养瓶中。

• 轻轻摇晃培养瓶，使MSTO-211H细胞均匀分布。

• 将培养瓶置于37°C、5% CO2培养箱中静置培养2-4小时，以稳定MSTO-211H细胞状态。

MSTO-211H细胞传代

• 传代频率：当MSTO-211H细胞密度达到80-90%时进行传代。

• 推荐传代比例：1:3-1:4。

• 吸出原培养液。

• 加入约2mL PBS，轻轻晃动培养瓶润洗MSTO-211H细胞，然后吸出PBS丢弃。

• 加入约1mL 0.25%胰蛋白酶溶液（含EDTA），轻轻晃动培养瓶使溶液浸润所有MSTO-211H细胞。

• 放入培养箱消化，当显微镜下MSTO-211H细胞变圆并出现间隙时终止消化，全程不要拍打培养瓶。

• 加入约3mL含血清的培养基终止消化，轻柔吹打MSTO-211H细胞使其脱壁并形成单细胞悬浮液。

• 收集MSTO-211H细胞悬液并以1200rpm/min离心3分钟，吸出上清丢弃。

• 加入新鲜培养基，混匀MSTO-211H细胞后按比例接种到新培养瓶，补足培养基，拧松瓶盖或使用透气瓶盖进行培养。

操作技巧

• 轻柔操作：由于MSTO-211H细胞贴壁松散，操作时需尽量轻柔，避免剧烈的机械震动。

• 避免过度密集：MSTO-211H细胞的饱和浓度可达4×10^5/cm²，但达到这个浓度时MSTO-211H细胞会从表面脱落。因此，应在MSTO-211H细胞密度达到80-90%时及时传代，避免过度密集。

MSTO-211H细胞冻存

• 冻存液配方：55%基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO。

• 将MSTO-211H细胞悬液分装到冻存管中，每管约5×10^5个MSTO-211H细胞。

• 使用程序降温仪或梯度降温法将MSTO-211H细胞缓慢冷却至-80°C。

• 24小时后转移到液氮中长期保存。

MSTO-211H细胞在高密度时的脱落原因及解决方法

• 细胞特性：MSTO-211H细胞具有贴壁松散的特性，贴壁能力较弱。

• 接触抑制：高密度时MSTO-211H细胞间接触抑制作用增强，导致黏附力减弱。

• 营养竞争：高密度培养时营养物质消耗加快，可能导致MSTO-211H细胞代谢异常，影响黏附能力。

• pH值变化：高密度培养加速培养基pH值的变化，影响MSTO-211H细胞黏附蛋白的表达或功能。

• 细胞分泌物累积：高密度时MSTO-211H细胞分泌的代谢产物和因子累积，影响黏附状态。

• 空间限制：高密度生长时可用空间减少，导致MSTO-211H细胞脱落。

解决方法

• 控制细胞密度：在MSTO-211H细胞密度达到80-90%时及时传代，推荐传代比例为1:3-1:4。

• 优化培养基配方：使用RPMI-1640培养基，添加10% FBS和1% P/S。可考虑添加细胞外基质蛋白（如纤连蛋白或胶原蛋白）以增强黏附。

• 及时换液：每周换液2-3次，保持培养环境稳定。换液时预热培养基避免温度骤变。

• 轻柔操作：操作时尽量轻柔，避免剧烈震动或机械刺激。

• 优化培养表面：使用预涂细胞外基质蛋白的培养皿或瓶，增强黏附能力。

• 调整培养条件：确保培养在37°C、5% CO2的环境中，保持适当湿度避免培养基蒸发。

• 减少消化时间：传代时一旦观察到MSTO-211H细胞开始脱离，立即终止消化。使用温和消化方法如Accutase或TrypLE。

• 监控pH值：定期检查培养基pH值，必要时使用HEPES缓冲液稳定pH。

• 添加生长因子：可添加适量表皮生长因子(EGF)或其他生长因子，促进MSTO-211H细胞黏附和生长。

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