NCM460细胞（人正常结肠上皮细胞）

NCM460细胞系来源于一名68岁西班牙裔男性的正常结肠上皮组织。患者因患有分化不良的胃肿瘤而接受部分胃切除术，手术切除的边缘延伸至横结肠部分。这部分横结肠组织被病理学家确定为正常，并用于NCM460细胞的原代培养。
NCM460是通过体外培养技术从正常结肠上皮细胞中分离并建立的人源正常结肠上皮细胞系。这些细胞表现出多克隆能力，能够在体外分化。

NCM460细胞特征

NCM460细胞角蛋白的阳性率超过90%
表达肠上皮标志性的绒毛和人分泌成分
对内皮标志物（如因子VIII）和多种淋巴细胞标志物（如CD4和CD23）呈阴性
偶尔有细胞亚群的波形蛋白呈阳性
通过周期性酸希夫染色和免疫测定，显示出神经内分泌标志物铬粒蛋白的表达
存在粘蛋白阳性细胞
NCM460细胞不会在软琼脂中生长
NCM460细胞在裸鼠中无致瘤性。

NCM460细胞参数表

细胞名称	NCM460细胞（人正常结肠上皮细胞）
细胞别称	NCM460 ； NCM-460
细胞类型	人正常结肠上皮细胞
来源	68岁西班牙裔男性的横结肠正常组织
形态生长特性	上皮细胞样；贴壁生长
生物安全等级	1级
致瘤性	在免疫抑制小鼠和半固体培养基中无致瘤性
收录	LONZA
培养基	1640培养基；10% FBS；1% 青霉素/链霉素 (P/S)
培养环境	37℃，5% CO2，饱和湿度
换液周期	2-3天
传代比例	1:2 - 1:4（视细胞生长速度及密度决定）
冻存液配方	92% FBS + 8% DMSO 或 92% 完全培养基 + 8% DMSO
细胞角蛋白表达	阳性率超过90%
肠上皮标志物	表达绒毛和人分泌成分，阳性
内皮标志物	因子VIII阴性
淋巴细胞标志物	CD4和CD23阴性
波形蛋白	偶尔细胞亚群呈阳性
神经内分泌标志物	表达铬粒蛋白
粘蛋白	存在粘蛋白阳性细胞
多克隆能力	具有体外分化的多克隆能力
软琼脂生长	不在软琼脂中生长
分化能力	可从非专用细胞分化为具有专用特征和功能的专用组织
保存期限	液氮中永久保存

培养教程

NCM460人正常结肠上皮细胞培养教程

细胞复苏

将含1mL NCM460细胞悬液的冻存管在37℃水浴中快速解冻。
将解冻的细胞悬液加入4-6mL预热的完全培养基中。
1000rpm离心3-5分钟，弃上清。
用新的完全培养基重悬细胞。
将细胞悬液转移到含6-8mL完全培养基的T25培养瓶中。
37℃培养过夜，次日观察细胞状态。

细胞传代

当NCM460细胞密度达到80%-90%时进行传代。
弃去培养上清，用不含Ca2+和Mg2+的PBS轻轻润洗细胞1-2次。
加入1-2mL 0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA溶液（用于T25瓶）。
37℃孵育1-2分钟，观察细胞脱落情况。
加入3-4mL含10% FBS的培养基终止消化。
1000rpm离心3-5分钟，弃上清。
用1-2mL新鲜培养基重悬细胞。
按1:2至1:4的比例将细胞分装到新的培养瓶中。
补充完全培养基至6-8mL（T25瓶）。

换液周期

换液周期：每2-3天更换一次培养基。
培养基用量： T25瓶使用10-12mL，10cm培养皿使用12-15mL。

细胞冻存

冻存液配方： 92% FBS + 8% DMSO 或 92%完全培养基 + 8% DMSO。
冻存方法：按常规方法收集细胞，制备细胞悬液。缓慢降温后转入-80℃冰箱或液氮中长期保存。