LS 174T细胞系来源于一名58岁白人女性的结直肠腺癌患者，分离自其结肠组织。ls174t细胞系来源于杜克氏B型腺癌，通过将组织切碎后，经过10个月的培养获得。LS174T细胞展示了上皮形态，并用于癌症研究。
LS 174T细胞系具有45, X；X染色体缺失1条，未见其他染色体畸变。

LS174T细胞特性特征

• 癌基因表达：myc+；myb+；ras+；fos+；p53+；sis；abl-；ros；src-

• 抗原表达：直肠抗原3阳性、p53抗原表达阴性，但mRNA表达阳性、角蛋白染色阳性、HLA-A2、B13、B50表达、血型为O型

• 基因表达和产物：产生大量癌胚抗原（CEA）、表达白细胞介素10（IL-10）、表达白细胞介素6（IL-6）、产生粘蛋白

• 致瘤性：ls174t细胞在裸小鼠中具有高度致瘤性（皮下接种10^7个细胞后21天内100%形成肿瘤）

• ls174t细胞比亲本细胞系LS 180更易于传代培养

• ls174t细胞是LS 180细胞系的胰蛋白酶化变种，通过在传代培养方案中使用胰蛋白酶来维持。

LS174T细胞参数表

LS174T人结肠腺癌细胞培养教程

细胞复苏

• 从液氮中取出冻存管，迅速置于37°C水浴中解冻，摇动管子以确保均匀受热，解冻时间约1-2分钟。

• 解冻后，用75%酒精消毒冻存管外表面，然后在无菌操作台上将LS174T细胞悬液转移至含10 ml完全培养基的离心管中。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 加入10 ml新鲜完全培养基，轻轻吹打LS174T细胞以确保均匀悬浮。

• 将细胞悬液转移至培养瓶中，放入培养箱中进行培养。

细胞培养

• 每2-3天更换一次培养基，以保持LS174T细胞的生长环境。

• 当LS174T细胞汇合度达到70-80%时，进行传代操作。

细胞传代

• 吸去旧培养基，用无钙镁PBS清洗LS174T细胞1-2次。

• 加入适量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，37°C孵育1-3分钟，观察细胞是否脱落。

• 轻轻敲打培养瓶以确保LS174T细胞完全脱落。

• 添加完全培养基以中和胰蛋白酶，轻轻吹打细胞以均匀悬浮。

• 按1:2至1:4的比例将LS174T细胞悬液分装到新的培养瓶中，加入新鲜培养基。

• 将培养瓶放入培养箱继续培养。

细胞冻存

• 当LS174T细胞达到70-80%汇合度时，按传代步骤收集细胞。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 加入冻存液（60%基础培养基 + 30% FBS + 10% DMSO），轻轻吹打LS174T细胞使其均匀悬浮。

• 将细胞悬液分装到冻存管中，每管1 ml。

• 将冻存管置于程序降温盒中，-80°C预冻过夜。

• 次日转移至液氮中进行长期保存。

注意事项

• 在细胞培养和处理过程中务必保持无菌操作，以防LS174T细胞污染。

• 胰蛋白酶消化时间需严格控制，以免对LS174T细胞造成损伤。

• 冻存和复苏过程应尽量避免对LS174T细胞的机械损伤。