TMK-1细胞（亦称TMK1）是人源胃癌细胞系，建立自一名21岁男性胃癌患者的肿瘤组织。TMK-1细胞呈上皮样形态，具备典型的贴壁生长特征，被广泛用于胃癌领域的研究。TMK-1细胞来探讨胃癌的发生与发展机制、肿瘤侵袭与转移过程、耐药性形成以及潜在的治疗靶点，为肿瘤学基础研究和新药开发提供实验模型。

TMK-1细胞特性特征

• TMK-1细胞中发现有p15基因重排，这是一种细胞周期调控基因的异常。

• TMK-1细胞系表现出细胞周期蛋白cyclins和CDKs（细胞周期依赖激酶）调控异常，促进胃癌细胞的无节制生长。

• p53基因在TMK-1细胞中带有突变（273位密码子G→A突变，导致Arg→His替代），影响其肿瘤抑制功能。

• TMK-1细胞表面存在高密度的EGF受体（约1×10^6个/细胞），可能促进细胞增殖和肿瘤发展。

• TMK-1细胞表达乳腺癌易感基因（如p21、p27）等细胞周期相关蛋白，在不同胃癌细胞株中表达水平存在差异。

• TMK-1细胞中存在多种细胞周期蛋白和抑制蛋白的表达失衡，如p15重排、p16蛋白表达缺失等，这些表征胃癌细胞的增殖和调控异常。

TMK-1细胞参数表

TMK-1人胃癌细胞培养教程

细胞复苏

• 从液氮罐中取出TMK-1细胞冻存管，立即置于37℃水浴中轻轻摇晃快速解冻，控制时间在1–2分钟以内。

• 解冻后迅速将TMK-1细胞悬液转入含有5 mL完全培养基的离心管中，轻轻混匀以降低DMSO毒性。

• 以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液，去除残留冻存液。

• 用4–6 mL完全培养基重悬TMK-1细胞，轻轻吹打均匀。

• 将细胞悬液接种至培养瓶或6 cm培养皿，置于37℃、5% CO₂培养箱中培养过夜。

• 次日更换新鲜培养液，观察TMK-1细胞贴壁情况及形态。

细胞传代

• 当TMK-1细胞贴壁生长至80%–90%汇合时，开始进行传代操作。

• 弃去培养液，用无钙镁PBS轻轻冲洗TMK-1细胞1–2次。

• 加入1–2 mL 0.25%胰酶-0.53 mM EDTA溶液，于37℃消化1–2分钟。

• 显微镜下观察，当TMK-1细胞变圆且即将脱落时，立即加入5 mL含10% FBS的完全培养基中和胰酶。

• 轻轻吹打使细胞均匀分散，随后以1000 rpm离心8–10分钟。

• 弃去上清液，用新鲜培养基重悬TMK-1细胞。

• 按1:2至1:4比例分装至新的培养瓶，加入5–6 mL培养基继续培养。

细胞冻存

• 选择生长状态良好的对数生长期TMK-1细胞进行冻存。

• 收集细胞悬液，以1000 rpm离心5分钟，弃去上清液。

• 用冻存液（92%完全培养基 + 8% DMSO）重悬细胞，密度约1×10⁶ 个/mL。

• 将TMK-1细胞悬液分装入冻存管，放入程序降温盒，于4℃静置10分钟。

• 随后转移至-20℃保存2小时，再放入-80℃过夜。

• 最终将TMK-1细胞冻存管移入液氮罐中进行长期保存。

注意事项

• 胰酶消化时间不宜过长，避免对TMK-1细胞膜造成损伤。

• 传代操作需保持轻柔，防止气泡和机械性损伤。

• 在复苏初期，需及时更换培养液，以提高TMK-1细胞的存活率。

• 冻存步骤中应快速完成，以防DMSO长时间作用造成细胞死亡