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您的当前位置:首页 > 产品信息 > 人源细胞系 > MKN-45细胞(人胃癌细胞)
产品名称:MKN-45细胞(人胃癌细胞)
产品详细说明
  • 来源:胃癌,肝转移
  • 细胞特征:半贴壁,圆形/上皮细胞样,部分呈圆形贴壁或悬浮生长
  • 培养基:生长培养基:RPMI-1640+10% FBS+1% P/S
  • 其他:MKN-45细胞表达野生型p53蛋白、c-met原癌基因扩增、E-钙粘蛋白(E-cadherin)启动子存在突变

MKN-45细胞系由Hojo H于1976年建立,源自日本一名62岁患有低分化胃腺癌女性患者的肝转移灶。该细胞系曾感染支原体,并通过MC-210处理成功消除。

MKN-45细胞在扫描电镜下显示为相当扁平的形态,细胞表面覆盖有大量微绒毛,细胞边缘存在长线状的细胞质突起,相邻细胞通过桥粒相连接。在光学显微镜下,MKN-45细胞呈圆形,表现为半贴壁半悬浮生长,有时会松散堆积。细胞排列不规则,生长中的细胞边缘不太清晰。

MKN-45细胞特性、基因表达等

  • 分子特征:表达野生型p53蛋白、c-met原癌基因扩增、E-钙粘蛋白(E-cadherin)启动子存在突变

  • 基因特征:p16CDKN2A/MTS1/INK4A基因纯合缺失、p15INK4B/MTS2基因纯合缺失

  • MKN-45细胞表现出正常及化生的胃粘膜表型、保持一定的分化能力

  • 染色体数目为67~71

  • MKN-45细胞扫描电镜显示细胞表面有大量微绒毛、细胞边缘有长线状的细胞质突起、相邻细胞通过桥粒连接

  • MKN-45细胞为半贴壁半悬浮生长、生长过程中容易成团

  • MKN-45细胞适用于裸鼠荷瘤实验,可形成侵袭性生长的皮下肿瘤

MKN-45细胞参数表

细胞名称 MKN-45细胞(人胃癌细胞)
简称 Human gastric cancer cell line ; MKN-45
组织来源 胃;腺癌细胞;低分化胃腺癌肝转移灶
建立信息 1976年由Hojo H建立,非ATCC细胞系
患者信息 62岁日本女性
细胞形态 圆形,上皮细胞样 / 细胞大小约15-20μm / 核质比约1:2
生长特性 半贴壁半悬浮
细胞表面/连接 大量微绒毛,长线状细胞质突起 / 相邻细胞通过桥粒连接
染色体数目/倍性 67~71 / 非整倍体
基因状态 p53野生型,p16和p15缺失,c-met扩增,E-cadherin启动子突变
微卫星不稳定性 MSI-L(低度微卫星不稳定)
培养基 RPMI-1640 / 10% FBS / 1% P/S
培养环境 37°C,5% CO2,95%湿度,pH 7.2-7.4
传代/换液 比例1:3-1:4 / 2-3次/周
消化方法 0.25% 胰蛋白酶-EDTA,2-3分钟
倍增时间 约30-60小时
培养容器 T25, T75, 6孔板, 96孔板等
冻存液/温度 55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO / -196°C
复苏方法 37°C水浴,快速解冻
鉴定/检测 STR已通过,支原体/细菌/真菌/HIV-1/HBV/HCV阴性
体外实验 药物筛选,信号通路研究,基因功能研究,3D培养
体内实验 裸鼠荷瘤模型,可形成侵袭性生长的皮下肿瘤
上皮标记 E-cadherin, EpCAM, CK8, CK18
胃癌标记 CEA, CA19-9, MUC1
其他标记 c-Met (高表达), VEGF, HER2 (低表达)
药物敏感性 5-FU和顺铂中度敏感,紫杉醇低敏,多西他赛中敏
主要通路状态 PI3K/AKT活化,MAPK部分活化,Wnt/β-catenin正常
代谢特征 葡萄糖消耗高;乳酸产生高;谷氨酰胺依赖性中;
侵袭转移能力 体外迁移中等,侵袭强 ; 体内裸鼠肺转移能力中等
表面标记 CD44阳性,CD133部分阳性
成球能力 成球能力中等
γ射线敏感性 中度敏感 (D0: 约2Gy)
培养注意点 易成团,消化需控制,用预处理培养皿,80-90%汇合度传代
血清批次效应 可能敏感,建议批次验证
安全等级 BSL-2
专利状态 无相关专利限制
原始文献 Hojo H. (1977). Niigata Igakkai Zasshi. 91:737-763.

培养教程

MKN-45人胃癌细胞培养教程

细胞复苏

  • 从液氮中快速取出冻存管,迅速放入37°C水浴中解冻。解冻后,将细胞悬液转移到预热的RPMI-1640培养基中。通过轻柔离心去除上清,用新鲜培养基重新悬浮细胞,并将其转移至培养瓶或培养皿中,放入预调好的培养箱中培养。

日常培养与传代

  •  每2-3天更换一次培养基,观察细胞生长情况。当细胞密度达到80%-90%时,使用PBS轻轻冲洗细胞,加入适量0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液进行消化。观察细胞在显微镜下变圆并开始脱落时,加入含血清的完全培养基终止消化。通过轻柔吹打使细胞充分脱落并分散,将其按照1:2或1:3的比例接种到新的培养瓶中。

特别注意事项与常见问题解决

  • 生长特性: MKN-45细胞呈半贴壁半悬浮生长,易于形成细胞团簇,需要在传代过程中特别注意分散细胞。

  • 消化时间控制: 消化时间通常控制在3-5分钟,以避免过度消化或不充分消化的问题。

  • 轻柔操作: 操作过程中要轻柔,特别是在吹打过程中,避免过度吹打导致细胞碎片产生。

  • 培养环境维护: 定期检查并校准培养箱的温度、CO2浓度和湿度,保持细胞的稳定生长环境。

STR鉴定及相关

Amelogenin X
CSF1PO 12
D2S1338 18
D3S1358 15,16
D5S818 10,11
D6S1043 14
D7S820 10,11
D8S1179 13,17
D12S391 26
D13S317 8,11
D16S539 10
D18S51 16
D19S433 14,16.2 (CCRID=1101HUM-PUMC000229; CLS=300489)
14,17 (DSMZ=ACC-409)
D21S11 31
FGA 19 (KCLB=80103)
19,24 (CCRID=1101HUM-PUMC000229; CLS=300489; DSMZ=ACC-409; PubMed=25877200)
Penta D 10
Penta E 10
TH01 7
TPOX 8
vWA 19
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