293T细胞源自人胚肾组织，在HEK-293细胞中插入SV40大T抗原基因后，获得了高转染效率的特性。

293T细胞最初名为293tsA1609neo，是在293 [HEK-293]细胞株基础上衍生而来的，通过插入SV40 T-antigen的温度敏感基因而形成，能够有效地复制携带SV40复制区的载体，并且在用于生产逆转录病毒时能够产生高滴度的病毒。

293T细胞由于其优异的性能，HEK-293T细胞已经成为基因表达、蛋白质生产和逆转录病毒生产等领域的首选细胞。

hek-293t人胚肾细胞特性

• 293T细胞最初称为293tsA1609neo，是293 [HEK-293]细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。

• hek-293t细胞能够复制携带SV40复制区的载体，用于生产逆转录病毒时，会产生高滴度病毒。

• 293T细胞已广泛用于逆转录病毒生产、基因表达和蛋白质生产。

• 293T细胞是高转染效率的衍生株，能够驱动外源基因的高效表达。

• hek-293t细胞系源自人胚肾组织，经过SV40大T抗原基因的插入，形成高转染效率的衍生株。

• 293T细胞在研究中广泛应用，特别适用于基因表达、蛋白质生产和逆转录病毒生产。

293t细胞参数表

hek-293t人胚肾细胞培养

细胞特性

• 贴壁性较差: 对贴壁因子有要求，最好进行包被处理；也可以提高血清比例来尝试。注意板材的亲水性，细胞贴壁松散，可只用EDTA消化，不要用胰蛋白酶过度消化。

• 增殖迅速: 倍增时间约为20小时，细胞增殖非常快，通常倍增时间不到一天，隔天即可长满。融合率不可过高，需要及时传代。

• 容易聚团: 消化下来的细胞容易成团，要吹打吹散。

细胞培养要点

• 贴壁性较差: 细胞容易飘起来，37℃静置可重新贴壁。换液时注意不要用力摇晃培养瓶。

• 容易消化: 消化下来的细胞容易成团，要吹打吹散。否则传代后细胞会成团生长，不均匀，影响实验结果。

• 传代时机: 当细胞生长至汇合率达到80~90%时需要对细胞进行传代操作，以扩大细胞数量，维持细胞良好的生长状态。

• 冻存: 随着传代次数增加，293T细胞会出现生长状态下降，出现突变等情况。所以要在细胞购进时就进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。

细胞冷冻操作

• 预热水浴锅至37℃。

• 快速融化: 将细胞从液氮中取出，立即放入水浴锅中快速摇晃冻存管，使其在1分钟内融化。

• 转移与离心: 用酒精擦拭冻存管，转移融化的细胞悬液到预先加好完全培养基的离心管中，离心1000rpm， 3-5分钟。

• 重悬与接种: 去上清，加入完全培养基重悬，接种到T25培养瓶中，放入37℃培养箱培养。

细胞传代传代步骤

• 吸出培养皿中的培养基。

• 加入1×PBS 2ml，轻轻旋转培养皿以清洗细胞，吸出弃去1×PBS。

• 加入胰蛋白酶0.5ml，静置3-5分钟。

• 静置期间，在倒置镜下观察细胞是否变圆，相互之间不再连接成片。

• 加入2倍体积的完全培养基，吹打，制成细胞悬液。

• 将细胞悬液转移到离心管中，1000 rpm，离心5分钟。

• 弃去消化液，轻敲离心管底，使细胞初步重悬。

• 加入1.5ml完全培养基，吹打混匀细胞。

• 将细胞悬液按比例分配到新的培养皿中。

• 将培养皿置于二氧化碳培养箱中培养。

注意事项

• 293T细胞贴壁性较差，传代时不要用力摇晃培养瓶。

• 换液时需预热培养基，用PBS清洗细胞时不要对着细胞吹打。

• 吹打细胞时动作尽量轻柔，不要吹出气泡。

• 细胞贴壁不牢时，尽量在室温消化10-30秒，也可以适当降低到0.05%的胰酶浓度进行消化。

• 选择合适的血清，避免批次间的差异对细胞造成影响。

• 及时冻存，保持实验的稳定性和持续性。