A431细胞系是从一位85岁女性患者的皮肤表皮样癌中分离，由D.J. Giard等人于1970年代建立。A431细胞系来源于实体瘤，具有上皮形态，细胞呈贴壁生长，广泛应用于癌症生物学、免疫肿瘤学和毒理学研究领域，A-431细胞系常用于致瘤性研究。

A431细胞是超三倍体，模态染色体数为74，出现在约36%的细胞中，倍性较高的细胞比例为1.0%。

A431细胞系特性特征

• EGFR过表达：A431细胞高度表达表皮生长因子受体（EGFR），是研究EGFR在肿瘤发生中作用的重要模型。

• 同工酶特征：AK-1 1; ES-D 1; G6PD B; GLO-I 2; Me-2 0; PGM1 1; PGM3 1。

• 致瘤性：在免疫抑制的小鼠体内，A431细胞可以形成快速生长的皮下肿瘤。在软琼脂中也能形成集落。

A431细胞系参数表

A431人表皮癌细胞系培养教程

复苏A431细胞

• 从液氮中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中，轻轻摇晃以加速解冻过程。

• 准备4 mL完全培养基（如DMEM，含10%胎牛血清和1%抗生素）。

• 将解冻的1 mL A431细胞悬液转移至含4 mL培养基的无菌离心管中，轻轻混合均匀。

• 在1000 rpm下离心3分钟，弃去上清液以去除冻存液中的DMSO。

• 加入1-2 mL培养基，轻轻吹打以重悬A431细胞。

• 将A431细胞悬液转移至培养瓶中，加入适量培养基（如在10 cm培养皿中加入约8 mL），放入37℃、5% CO₂的培养箱中过夜。

• 第二天更换培养基，并检查A431细胞的密度及健康状态。

传代A431细胞

• 当A431细胞密度达到80%-90%时，准备进行传代。

• 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤A431细胞1-2次，以去除残留的培养基和死细胞。

• 加入1 mL消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53 mM EDTA），确保完全覆盖A431细胞。

• 将培养瓶放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察A431细胞是否开始脱落。

• 当A431细胞大部分变圆并脱落时，轻轻敲击培养瓶，并加入少量培养基以终止消化。

• 加入6-8 mL培养基，轻轻混匀后转移至无菌离心管中，1000 rpm离心4分钟，弃去上清液。

• 加入1-2 mL培养基，轻轻吹打以重悬A431细胞。

• 将A431细胞悬液以1:2的比例分配到新的培养皿或瓶中，每个含8 mL培养基，放入培养箱中继续培养。

冻存A431细胞

• 准备冻存：当A431细胞状态良好且生长适中时，进行冻存处理。

• 收集A431细胞及培养液，转移至无菌离心管中。

• 在1000 rpm下离心4分钟，弃去上清液。

• 加入含10% DMSO的冻存液，轻轻混匀。

• 将A431细胞悬液分装至冻存管中，标记清楚后放入-80℃冰箱中进行短期冻存，或直接转移至液氮中进行长期冻存。

注意事项

• 在整个A431细胞培养过程中，保持严格的无菌操作，以防止细胞污染。

• 定期检查A431细胞的生长状态，适时更换培养基。

• 确保A431细胞在传代和冻存过程中处于健康状态，避免过度生长或细胞死亡。