WM115细胞系是一种源自55岁女性患者原发性浅表性黑色素瘤的细胞系，WM115细胞系在右前腿的转移部位建立。患者的肿瘤为垂直生长期(VGP)，Clark分级为III级，厚度为2.24毫米。

WM115细胞特性特征

• Wm115细胞具有转移能力和致瘤性、属于垂直生长期（VGP）原发性黑色素瘤细胞系、在免疫功能受损的小鼠体内可形成异种移植物肿瘤

• BRAF基因：在密码子600处携带V600D（Val600Asp）突变

• PTEN：表现出功能丧失，包括半合子缺失

• N-RAS、c-KIT和CDK4基因：均为野生型

• Wm115细胞与WM239A、WM165-1和WM266-4细胞系来自同一患者

• WM115来源于原发性肿瘤，而其他三种来自单个淋巴结转移

WM115细胞参数表

WM115人恶性黑色素瘤细胞培养教程

WM115细胞复苏

• 快速解冻：将冻存的WM115细胞从液氮中取出，置于37℃水浴中快速解冻1-2分钟，注意不要超过2分钟以免影响WM115细胞活性。

• 转移细胞悬液：将解冻的WM115细胞悬液迅速转移到含有4mL预温培养基的15mL离心管中。

• 离心：在1000rpm下离心3分钟，小心弃去上清。

• 重悬细胞：用1-2mL新鲜培养基轻轻重悬WM115细胞。

• 接种：将WM115细胞悬液转移到含适量培养基的培养瓶或培养皿中。

• 培养：将培养容器放置于37℃，5% CO2的培养箱中培养过夜。

• 更换培养基：次日观察WM115细胞状态，进行新鲜培养基的更换。

WM115细胞传代

• 当WM115细胞密度达到80%-90%时，应进行传代，以保持WM115细胞的活力和增殖能力：

• 去除培养上清：弃去WM115细胞培养上清液后，用PBS轻柔冲洗WM115细胞1-2次。

• 消化：加入适量0.25% Trypsin-0.53mM EDTA溶液，37℃下消化约1分钟。

• 观察脱落：在显微镜下观察WM115细胞脱落情况，轻拍培养瓶以促进WM115细胞脱落。

• 终止消化：加入等体积的培养基终止消化过程。

• 离心：在1000rpm下离心4分钟，弃去上清液。

• 重悬细胞：用新鲜培养基重悬WM115细胞。

• 接种新容器：按1:2至1:4的比例将WM115细胞分装到新的培养容器中，补加适量培养基。

• 培养：将新培养容器置于培养箱中继续培养WM115细胞。

WM115细胞冻存

• 为了长期保存WM115细胞株，应在对数生长期进行细胞冻存：

• 收集细胞：收集生长状态良好的WM115细胞。

• 离心：在1000rpm下离心5分钟，弃去上清。

• 重悬细胞：用预冷的冻存液重悬WM115细胞。冻存液配方：55%基础培养基 + 40% FBS + 5% DMSO。

• 调整密度：将WM115细胞密度调整至1×10^6 cells/mL。

• 分装冻存管：将WM115细胞悬液分装入冻存管中，每管1mL。

• 程序降温：将冻存管置于程序降温盒中，-80℃冰箱中过夜。

• 转入液氮：次日将冻存管转入液氮中长期保存WM115细胞。

WM115细胞培养注意事项

• 培养环境：37℃，5% CO2，饱和湿度。

• 换液频率：每周2-3次，以维持WM115细胞培养基的新鲜和WM115细胞的正常代谢。

• 传代密度：应保持WM115细胞密度在80%-90%之间进行传代。

• 倍增时间：约50-60小时。

• 细胞形态：WM115细胞呈现上皮样细胞形态，贴壁生长。

• 污染控制：定期进行支原体检测，确保使用无菌技术操作以避免WM115细胞培养中的污染。